丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)

丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)
产品简介：
转氨酶是催化α-氨基酸和α-酮酸之间氨基转换反应的一组酶，丙氨酸氨基转移酶(ALT)旧称谷丙转氨酶(GPT)主要存在于肝细胞浆内，细胞内ALT浓度远高于血清，肝细胞破坏后血清ALT立即迅速升高，因此谷ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害敏感的检测指标。

丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒(单试剂速率法)其检测原理是丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，丙-酮酸与NADH经LDH催化生成NAD+，上述方法实际为ALT速率法，其反应公式如下：

L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙-酮酸+L-谷氨酸。丙-酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD+。
在上述偶联反应中NADPH的氧化速率与样本中酶活性呈正比。对于单试剂速率法，血清与试剂完整成分的底物溶液混匀，ALT催化反应立即启动，通过分光光度计或自动分析仪检测在340nm处吸光度下降速率(-ΔA/min)，下降速率(-ΔA/min)与ALT活性呈正比，进而计算酶的活性单位。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：
1、蒸馏水
2、比色杯、分光光度计或自动分析仪

操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃
保存1个月有效，用于ALT/GPT的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃保1个月有效，用于ALT/GPT的检测。
③(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ALT/GPT含量。
2、分光光度计检测：按照下表设置对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。注意：由于酶促反应时间极短，建议立即检测，加样时间越短越，其反应基本在1~2min内，其后反应趋于平缓。对照检测参考值在1~3min变化为1.1~0.8之间。由于检测仪器、操作手法以及样品酶活性高低等条件的不同，参考值范围会有波动如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
对于量程比较大的比色杯，其加样量应相应增多，检测样本量则对应减少；对于量程比较小的比色杯，其加样量应相应减少，检测样本量则对应增加。
3、生化分析仪检测：按照下表设置主要参数，如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
参考范围：成年健康人血清ALT：0~40U/L

注意事项：
1、抗坏血酸≤40mg/dl，游离胆红素≤40mg/dl，结合胆红素≤40mg/dl，血红蛋白≤500mg/dl对测定结果无影响。
2、如果生化分析仪内无所要求波长的滤光片，应选择接近的滤光片。
3、血清中ALT活性在室温可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1个月。
4、严重黄疸、脂血或溶血的血清，可能会引起测定管吸光度增高。