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Cas12a检测系统用双标记探针
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惠诚生物
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上海惠诚生物提供Cas12a检测系统用双标记探针(DNA Biotin和FAM双标记)。
CRISPR_Cas核酸酶主要包括两类:一类是RNA引导下可以切割RNA链的Cas13a和Cas13b;另一类是RNA引导下可以切割DNA链的Cas12a和Cas14。Cas12a和Cas13都有一个共同特点,除了切割靶向DNA或RNA序列之外,还可以切割其他DNA或RNA序列,但是Cas13酶的这种附加切割能力比Cas12a要强。Cas12a的靶基因是ssDNA和dsDNA,并且Cas12a引导链需要识别PAM序列(Cas12a的PAM序列为TTTV)。
Cas12a 核酸酶(其他名称 Cpf1)是依赖于 RNA 介导的内切核酸酶,在靶标 DNA 存在 PAM 的情况下, 可特异地切割靶标双链 DNA。与 Cas9 不同:(1)Cas12a 只需要单个 crRNA,且体积更小、更易 被递送至细胞中;(2)Cas12a 切割后产生粘性末端,更利于基因组精确编辑;(3)Cas12a 的切 割位点远离其识别位点,为连续多次编辑提供了可能性;(4)Cas12a 识别的 PAM 序列与 Cas9 不 同,因此提供了不同编辑位点的选择;针对不同的 Cas12a 蛋白,其识别靶标所需的 PAM 位点不 同,其中部分 Cas12a 蛋白识别 TTN 位点,部分 Cas12a 蛋白识别 TTTN 位点。
DNA探针的标记方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移法、随机引物法、PCR标记法等,能用于同位素和非同位素标记。
DNA探针技术又称分子杂交技术,是利用DNA分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性,对某一特异性DNA序列进行探查的新技术。DNA探针是利用同位素、生物素等标记的特定DNA片断,该片断可大至寄生虫基因组DNA,小至20个碱基。当DNA探针与待测的非标记单链DNA(或RNA)按碱基顺序互补结合时,以氢健将2条单链连接而形成标记DNA-DNA(或标记DNA-RNA)的双链杂交分子。将未配对结合的核苷酸溶解后用检测系统(放射自显影或酶检测等)检测杂交反应结果。由于DNA分子碱基互补的精确性,单连DNA探针仅与样品中变性处理的DNA单链出现配对杂交,由此决定了探针的特异性;用放射性同位素(如32P)或生物素标记探针,使杂交试验同时具有高度的敏感性。
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