乙酸激酶(ACK)测试盒_微量法

乙酸激酶(ACK)测试盒_微量法
测定方法：微量法
产品规格：100管/96样
储存条件：低温保存
注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：                           
ACK主要存在于微生物中，催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP，是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶，尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。

测定原理：
（1）ACK催化乙酸钠和ATP生成乙酰磷酸和ADP，（2）催化ADP和PEP生成ATP，（3）乳酸脱氢酶催化NADH生成乳酸和NAD⁺，（4）在340nm下测定NADH氧化生成NAD⁺速
率，即可反映ACK活性。

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2瓶，-20℃保存；
试剂三：液体500μL×1支，4℃保存；




测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定

（1）工作液的配置：临用前取试剂二一瓶，加入10mL试剂一和200μL试剂三，充分混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL样本和180μL工作液，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 3min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。