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- 文献和实验
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麦飞生物
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现货
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/
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200/盒,2盒/箱
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文献和实验)。4.培养时间。200ul的培养液对于10的4~5次方的增殖期细胞来说,很难维持68h,如果营养不够的话,细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止,影响结果,我们是在48h换液的。5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力,不能测定细胞绝对数。做MTT时,尽量无菌操作,因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。6.理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整。7.实验时应设置调零孔,对照孔,加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜,不同的是对照孔加溶解
细胞(BK或BT),用Earle’s液洗一次后,按原培养液1/10的量接毒。置37℃温箱吸附1h,然后加入pH7.1~7.2含青、链霉素200g/μgml的LE液至原培养液量,37℃培养,待80%~90%出现典型IBR病变时收获培养物,冻融2次后,3 000r/min离心10min,其上清即为病毒抗原。测定病毒滴度(TCID)并分装小瓶,贮于-70℃备用。半年内滴度保持不变。 3.病毒滴度测定 将制备的病毒抗原,用pH7.0~7.2的LE液作10倍递增稀释至10-7,每病毒稀释滴度液接种
基并混合。时间恒定值应在4.5~5.5毫秒范围之间。如果时间恒定值小于4.3秒,则重复DNA沉淀。 6.在每次电转化后的细菌中加入lmlSOC培养基,以250r/min振荡培养,37℃1小时。 7.合并所有电转化培养液,系列稀释后在100mm TYE/amp/glu平板上铺板确定文库容量。 8.以200g、4℃10分钟离心剩余的细菌培养液。将每4次电转化的沉淀重悬于500u1的体积。以每份125ul等量体积分别铺于150mmTYE/amp/glu平板上或将500ul铺于含TYE/amp/glu
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