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麦飞生物
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现货
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/
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100支/包,20包/箱
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文献和实验2mol/L Tris,使溶液的pH值在7.0左右,以中和洗脱下来的噬菌体溶液。 8. 立即加入2ml新鲜制备的OD600 =1左右的Ecoli XLIBlu菌,室温孵育15~20min。 9. 转入一200ml三角瓶中,加入10ml SBA T (SB培养基,20μg/ml氨苄青霉素,10μg/ml四环素)立即取10μl、1μl和01μl涂LB氨苄平皿以滴定洗脱下来的噬菌体,其余部分转入三角瓶,于37℃振荡培养1h。 10. 加入
1,超声效果判定: a)一般要在超的过程中监测,超几下就做个玻片染色,在你的视野里应该还能看到几个没有破碎的菌才行,没有这样完好的菌存在就说明你超过了,蛋白就会完蛋了。监测几次就有经验了,也不用每次都染就行了。最简单的方法:涂片--革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟---显微镜观察 切记:只用结晶紫染色,别忘了染色后再用水稍冲洗一下 b)我们的作法是:在第一次使用超声破碎仪时监测OD600以确定功率和时间,取5微升样品加入1毫升水,OD600降到起始值的10%以下时说明破菌完成。 c
。 (c)将盛有菌悬液的2平皿置于磁力搅拌器上,在距离为30cm,功率为15W的紫外线灯下分别搅拌照射1分钟及3分钟。 (4)稀释在红灯下,将上述经诱变处理的菌悬液以10倍稀释法稀释成10-1 -10-6 (具体可按估计的存活率进行稀释)。 (5)涂平板取10-4 、10-5 、10-6 三个稀释度涂平板,每个稀释度涂平板3只,每只平板加稀释菌液0.1ml,用无菌玻璃刮棒涂匀。以同样操作,取未经紫外线处理的菌稀释液涂平板作对照。 (6)培养
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