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- 文献和实验
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- 供应商:
麦飞生物
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现货
- 保修期:
/
- 规格:
10盒/包,5包/箱
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文献和实验管盖,颠倒混匀,冰浴 10 min 。 6. 12,000 r/min 离心 10 min ,将上清转移到一个新的干净离心管中。 7. 向上清中加 0. 6 倍体积的异丙醇,混匀,室温作用 15 min , 12,000 r/min 离心 10 min 。 8. 弃上清,用 200ul70 % 乙醇洗沉淀一次,倒扣在纸巾上凉干。 9. 用 50ul100 μg/ml RNA 酶的 TE 溶解沉淀, 65℃ 作用 30 min 后,补加 400ulTE 。 10. 加
振荡l小时。对于第一轮选择,抗原浓度应分别为Kd/l、Kd/10以及Kd/100;此处Kd=针对抗原的野生型抗体亲和力。 5. 每管加入50ul链霉亲和素化磁珠并在转台上孵育,室温15分钟。将试管放入磁架30秒。磁珠将移向磁体。 6. 抽吸上清,让磁珠留在微量离心管一侧。最好是用200u1吸头套在巴氏吸管上,再接 到真空源上进行。用PBS/Tween洗涤磁珠7次(每次洗涤用1ml),接着用MPBS洗涤2次,再用PBS洗涤1次。每隔一次洗涤就将磁珠转移到1个新的1.5ml试管中,以充分洗涤
。按步骤7回收核酸沉淀。 9.加入50ul TE(PH8.0)(含无DNA酶的RNA酶 20ug/ml),溶解DNA,稍加振荡,储存于-20℃。 (二)大量制备 碱变性法: 1.从平板上挑选一个单菌落,接种到50mL培养基,37℃过夜培养14~16小时。 2.将培养物转入50mL离心管,4,800r/min 4℃离心10分钟。 3.沉淀用10mL STE洗涤,涡旋打匀, 4,800r/min 4℃离心10分钟。 4.加入3mL溶液I,涡旋,冰浴
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