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999
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麦飞生物
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现货
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/
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10块/包,5包/箱
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文献和实验at least 2 mg (up to 4mg) of total RNA in 750 l RNase-free water. In general, inputting more total RNA will yield more polyA RNA. This protocol is most successful with inputs of at least 2 mgs. (Less than 1mg of total RNA input is NOT recommended
孵育10min。 6) 室温750g离心10min,小心抽吸PEG/CaT溶液,颠倒管,轻叩管壁以排出多余的PEG/CaT溶液。 7) 用150ulSOS培养基悬浮转化细胞,室温孵育20min。 8) 加入850ul1M山梨醇,接下来涂板。 2. 涂板:毕赤酵母去壁细胞需要铺在顶层琼脂糖或琼脂上,以防止在选择前被裂解 1) 接第8步,取100-300ul去壁细胞-DNA,与10ml融化的RD琼脂糖混匀倒于RDB平板
离心5分钟1.6.将上清倒去,使用FA裂解液将沉淀重悬浮(1x107cells/750μl).初始细胞要有1*107-5*107个,采用终浓度为0.75%甲醛和如上描述的甘氨酸处理。预冷PBS洗3次,1,000g离心5分钟,沉淀用FA裂解液重悬浮。2 超声破碎超声裂解细胞悬液可以将DNA均一的打断成500-1000bp的片段。不同的细胞系需要不同的超声时间才能达到最优效果。交联细胞要通过时间梯度的超声来选择最优超声条件。样品通过时间梯度,DNA的分离如部分3所描述。片段大小序在1.5%的琼脂
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