货号：431465T Corning 培养瓶，150cm

转管及转瓶培养

，以维持合适的氧和pH 水平，通过转动可使细胞交替接触培养液和空气，营养可被充分利用。若需增加细胞产量，除可在增加转瓶的数量和容积外，使瓶直径尽可能小，此时表面面积可因直径或长度的倍增而成倍增加。转瓶培养也可使用灌注培养系统，因此系统需要错综复杂回旋的可连续供应的管道进入瓶内，这是一种昂贵的选择。［实验程序］：本程序是在1400cm2(23×12cm)一次性塑料瓶上使用的（Corning 或Becton Dickinson）程序。1、加入300ml生产培养液于转瓶中。2、加入1.5×107细胞

优化你的类器官培养水凝胶选择

，比如Millicell® EZ SLIDE 8孔无菌腔室载玻片（货号PEZGS0816） 4.混合液37 0C孵育20分钟。也可以室温孵育，但凝固所需时间更久。 5.吸头轻触凝胶，检查凝胶是否形成。收回吸头后，吸头表面没有凝胶线代表成胶。 6.加入充足的培养基覆盖凝胶。 7.培养皿或培养瓶盖上盖子，在组织培养箱中培养。 8.培养1小时后，更换培养基（换液）。 9.细胞培养期间按照要求换液。 采用TrueGel3D™酶促细胞回收液溶解TrueGel3D™水凝胶细胞 向培养基中添加TrueGel3D™酶促细胞回收液

各类细胞培养小结

表面的透明软骨，以磷酸缓冲液（PBS含青霉素、链霉素各100U/L）冲洗2遍，将软骨剪切成1－3mm3 左右碎块，0.25%胰蛋白酶先消化30-35分钟，PBS浸洗2遍；后置于50ml玻璃培养瓶，加0.1%Ⅱ型胶原酶(DMEM配制)，37消化3.5－4.5小时，每小时置37℃恒温振荡箱振荡5min。直到软骨块大部分呈肉眼可见的絮状物，倒置显微镜下观察，软骨细胞大部分分离后，以弯头吸管轻轻吹打，细胞悬液以1200r/min离心7分钟，弃上清，以含10％新生牛血清DMEM的培养液终止消化，离心弃上清