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- 详细信息
- 文献和实验
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999
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麦飞生物
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现货
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/
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文献和实验表面的透明软骨,以磷酸缓冲液(PBS含青霉素、链霉素各100U/L)冲洗2遍,将软骨剪切成1-3mm3 左右碎块,0.25%胰蛋白酶先消化30-35分钟,PBS浸洗2遍;后置于50ml玻璃培养瓶,加0.1%Ⅱ型胶原酶(DMEM配制),37消化3.5-4.5小时,每小时置37℃恒温振荡箱振荡5min。直到软骨块大部分呈肉眼可见的絮状物,倒置显微镜下观察,软骨细胞大部分分离后,以弯头吸管轻轻吹打,细胞悬液以1200r/min离心7分钟,弃上清,以含10%新生牛血清DMEM的培养液终止消化,离心弃上清
. 接种于底壁上. 每瓶20-25块左右. 每小块间距0. 5c M左右。组织块放置好后. 轻轻将培养瓶翻转. 让瓶底朝上. 向瓶内加入2 Ml左右的培养液. 盖好瓶盖. 将培养瓶倾斜放置在温箱中. 干贴壁2-4小时后. 将培养瓶慢慢翻转平放. 继续静置培养。注意上述操作过程中动作要轻柔. 让液体慢慢覆盖组织小块. 严禁动作过快致使液体产生的冲力使粘贴的组织块飘起而造成原代培养的失败。37 ℃. 5% CO2培养箱培养. 24 h补加培养液后继续培养. 48
反应性聚合物与多肽均匀反应。样品孵育20 min,使RGD肽连接到聚合物的马来酰亚胺基上。 3.将交联剂(PEG细胞不可降解交联剂或CD细胞可降解交联剂)加到无菌培养皿*表面。交联剂不要铺开,要保持单滴的液滴形式。 * 可使用多孔板(6、24或96孔)或适用的无菌培养板或培养瓶。推荐使用未经组织培养处理的聚苯乙烯。如需细胞成像,建议使用带细胞培养腔室的载玻片,比如Millicell® EZ SLIDE 8孔无菌腔室载玻片(货号PEZGS0816) 4.在含有水、缓冲液、FAST巯基反应性聚合
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