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麦飞生物
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文献和实验个),两个试管 吸管 (5~8个)大镊子 (两把,持物,例夹棉球等) 台面:磁力搅拌器、纱布(事先用于托盘装0.1%新洁尔灭浸泡)、试管架、泡沫塑料板、五个针头(不用消毒)75%酒精棉球及碘酒(消毒棉球,泡酒精、碘酒)大镊子两把(一把夹棉球,一把取鼠)、3个250ml烧瓶(一个装一蒸水,一个装新洁尔灭,另一为空的备用)1个500ml烧瓶(废液缸)、温度计、PH试纸(事先调PH值)、酒精灯、打火机/火柴、载玻片(5-10个)[用于培养前看接种密度及消化后看细胞密度]、注射器5ml 6个(胰酶、DMEM
,但如果需要,可以使用更浓缩的干细胞合格ECM凝胶。 3.将1.5 mL 1:80稀释的ECM凝胶基质(CC131)加入6孔板的每个孔中。 涡旋培养板,以使ECM凝胶基质均匀地铺展在板的表面上。 使用前,将其存放在2-8°C的冰箱中冷藏过夜或至少2小时。 如果不立即使用,用保鲜膜将ECM包被的培养板包好,并储存于2-8 °C下直至准备使用。应在3-4天内使用ECM包被的培养板。 4.在接种细胞之前,将板放回到室温下10-15分钟,除去包被溶液,然后每孔加入3 mL人ES/iPSC生长培养基(SCM130
3离心后. 离心管内分为三层. 上层为血浆和PBS液. 下层主要为红细胞和粒细胞。中层为淋巴细胞分离液. 在上层中层界面处有一以单个核细胞为主的白色云雾层. 为淋巴细胞和单核细胞和少量血小板的混合物。 4用1 Ml吸管插到云雾层. 吸取单个核细胞。置入另一15 Ml离心管中. 加入5倍以上体积的PBS. 1 500 rp M×10 Min. 洗涤细胞两次。 我的心得: 第2步. 一定要缓慢添加
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