货号：3875 Corning 96孔板，黑色，半区，T

各类细胞培养小结

表面的透明软骨，以磷酸缓冲液（PBS含青霉素、链霉素各100U/L）冲洗2遍，将软骨剪切成1－3mm3 左右碎块，0.25%胰蛋白酶先消化30-35分钟，PBS浸洗2遍；后置于50ml玻璃培养瓶，加0.1%Ⅱ型胶原酶(DMEM配制)，37消化3.5－4.5小时，每小时置37℃恒温振荡箱振荡5min。直到软骨块大部分呈肉眼可见的絮状物，倒置显微镜下观察，软骨细胞大部分分离后，以弯头吸管轻轻吹打，细胞悬液以1200r/min离心7分钟，弃上清，以含10％新生牛血清DMEM的培养液终止消化，离心弃上清

优化你的类器官培养水凝胶选择

，比如Millicell® EZ SLIDE 8孔无菌腔室载玻片（货号PEZGS0816） 4.混合液37 0C孵育20分钟。也可以室温孵育，但凝固所需时间更久。 5.吸头轻触凝胶，检查凝胶是否形成。收回吸头后，吸头表面没有凝胶线代表成胶。 6.加入充足的培养基覆盖凝胶。 7.培养皿或培养瓶盖上盖子，在组织培养箱中培养。 8.培养1小时后，更换培养基（换液）。 9.细胞培养期间按照要求换液。 采用TrueGel3D™酶促细胞回收液溶解TrueGel3D™水凝胶细胞 向培养基中添加TrueGel3D™酶促细胞回收液

实验小窍门

。先预冷切片的底座.  然后再将标本放在底座上预冷.  由于标本表面含有水分.  自然就会与底座粘紧。预冷至标本表面长白霜.  所需时间长短不一.  1c M3大小的标本.  约需5  Min。   4.   包埋时.  由下到上.  尽量均匀涂抹.  不要留空隙.  特别是底部.  螺旋状向上盘旋。标本周围包埋剂的厚度在1-2 M M之间.  底部3-4 M M为宜。   5.   OCT包埋剂不能包的太多或太少。太多.  切出来的脑组织切片容易卷曲；太少.