测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到680 nm,蒸馏水调零。
2.试剂二、试剂三和试剂四置于40℃水浴保温30min。
3. 对照管:取0.5 mL EP管,加入20 μL粗酶液,40 μL试剂二,混匀后置于40℃水浴保温10min;加入40μL试剂三,混匀后8000g ,4℃离心10min;取40μL上清液,加入新的EP管,再加入200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,吸取200μL于680nm测定光吸收,记为A对照管。
4. 测定管:取0.5 mL EP管,加入20μL粗酶液,40μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min;加入40μL
试剂二,混匀后8000g,4℃离心10min;取40μL上清液,加入新的EP管,再加入200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,吸取200μL于680nm测定光吸收,记为A测定管。(注意与空白管不同,先加试剂三,后加试剂二)
5. 空白管:取0.5 mL EP管,加入40μL蒸馏水,200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,吸取200μL于680nm测定光吸收,记为A空白管。
6. 标准管:取0.5 mL EP管,加入40μL标准品,200μL试剂四,40μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,吸取200μL于680nm测定光吸收,记为A标准管。
注意:空白管和标准管只需要测定一次。