羧酸酯酶(CarE)测试盒_微量法

羧酸酯酶(CarE)测试盒_微量法
测定方法：微量法
产品规格：100管/96样
储存条件：低温保存
注   意 ：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。

测定原理：
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固篮显色；在450 nm光吸收增加速率，计算CarE活性。

自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

试剂组成和配置：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体15mL×2瓶， 4℃保存；
试剂三：粉剂×2支， 4℃保存，临用前取1支试剂三，加0.6ml无水乙醇充分溶解；
试剂四：粉剂×2支，-20℃保存，临用前取1支试剂四，加少量试剂二溶解；
工作液配制：临用前配制，向1瓶试剂二中，加入溶解后的试剂三和试剂四各1支，充分溶解，过滤，4℃避光保存，可用1周。




测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到450 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中预热30 min。
3. 空白管：取微量玻璃比色皿/96孔板，依次加入5μL蒸馏水和200μL试剂二，迅速混匀，于450nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。△A空白管=A2-A1
4. 测定管：取微量玻璃比色皿/96孔板，依次加入5μL上清液和200μL试剂二，迅速混匀，于450nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3

注意：空白管只需测定一次。