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- 晶抗生物
- JK-R7110
- 国内
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 库存：
589
- 样本：
来电咨询
- 标记物：
详见说明书
- 适应物种：
来电咨询
- 应用：
仅供科研研究使用
- 检测方法：
微量法
酪氨酸解氨酶(TAL)测试盒_微量法
测定方法：微量法
产品规格：100管/48样
储存条件：低温保存
注 意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
TAL广泛存在于植物和微生物中，是苯丙氨酸代谢途径的关键酶之一。TAL能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）直接将酪氨酸转化为香豆酸，香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。
测定原理：
TAL能够分解酪氨酸产生香豆酸，使反应溶液333nm下的吸光度随反应时间而上升，根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板（UV板）、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；
试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存；
测定步骤：
1、酶标仪预热30min以上，调节波长至333nm。
2、准备96孔UV板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。
3、试剂二的配置：临用前在试剂二瓶中加入10mL试剂一充分溶解待用（用不完的试剂4℃保存一周，注意现配现用），在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
4、在EP管中依次加入如下试剂
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 样本上清 | 40 | 40 |
| 试剂一 | 360 | |
| 试剂二 | 360 | |
| 充分混匀，40℃保温60min | ||
| 试剂三 | 20 | 20 |
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文献和实验增加。但总的来看，反应温度的影响不很大，一般从0℃ 到20℃碘利用率相差不过百分之几，故一般在室温下进行标记操作就可能获得重复性好的结果。有些蛋白质或肽类极易丧失活性，则可在0℃进行碘化反应。 （6）碘化反应的pH值：受氧化剂氧化生成的活性碘，对多肽链的酪氨酸基苯环羟基邻位的碘化作用，最适pH是7.3～7.8之间。当pH变化时，碘化位置也会发生变化，例如pH值较高时，组氧酸的咪唑环也可被碘化；当pH4～5时，活性碘能迅速氧化色氨酸基生成羟基吲哚，导致肽链断裂。这些都会影响蛋白质或多肽的放射
，碘利用率有所增加。但总的来看，反应温度的影响不很大，一般从0℃ 到20℃碘利用率相差不过百分之几，故一般在室温下进行标记操作就可能获得重复性好的结果。有些蛋白质或肽类极易丧失活性，则可在0℃进行碘化反应。 （6）碘化反应的pH值：受氧化剂氧化生成的活性碘，对多肽链的酪氨酸基苯环羟基邻位的碘化作用，最适pH是7.3～7.8之间。当pH变化时，碘化位置也会发生变化，例如pH值较高时，组氧酸的咪唑环也可被碘化；当pH4～5时，活性碘能迅速氧化色氨酸基生成羟基吲哚，导致肽链断裂。这些都会
色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。folin―酚试剂中的磷钼酸盐―磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。folin―酚试剂法最早由lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰
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