NAD激酶(NADK)测试盒_微量法

NAD激酶(NADK)测试盒_微量法
测定方法：微量法
产品规格：100管/48样
储存条件：低温保存
注    意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
NADK（EC 2.7.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或无机[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。

测定原理：
NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH；在340 nm下测定NADPH增加速率。可反映出NADK活性的大小。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的组成和配制：
提取液：液体100 mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体10 mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体25 mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，-20 ℃保存；
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；




测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、将试剂一和试剂二37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min以上。
3、工作液Ⅰ的配制：在试剂三中加入5mL试剂一，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
   工作液Ⅱ的配制：在试剂四中加入18mL试剂二，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁

  止反复冻融；
4、加样表

试剂名称(μL)	测定孔	对照管
样本	20	20
工作液Ⅰ	80
试剂一		80

充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min，立即煮沸
2min（盖紧，防止水分散失）冰浴冷却，10000g，25℃离心10min，取上清

上清液	40	40
工作液Ⅱ	160	160

加完试剂混匀，室温静置15min，340nm下测定吸光值，ΔA=A测定-A对照。