二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)测试盒_可见分光光度法

二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)测试盒_可见分光光度法
测定方法：可见分光光度法
产品规格：25管/24样    
储存条件：低温保存
注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
二磷酸核酮糖羧化酶（EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO₂的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。

测定原理：
在Rubisco的催化下，1分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与1分子的CO₂结合，产生2分子的3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶I（NADH）氧化。因此，340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶I氧化速率，还原型辅酶I氧化速率可反应Rubisco的活性。

需自备的仪器和用品：
可见-紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：
提取液一：液体25mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：30mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入12.5mL试剂一，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入12.5mL试剂一，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入1.25 mL试剂一，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（注意：试剂二、三、四溶解后，按需分装-20℃保存。）





测定步骤：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定

1. 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三1：1混合，用多少配多少；
2. 在1mL石英比色皿中加入50uL样本、50uL试剂四和900uL工作液，混匀，立即记录340nm处20s时吸光值A1和5min20s时的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。