线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C氧化酶测试盒_可见分光光度法

线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C氧化酶测试盒_可见分光光度法
测定方法：可见分光光度法
产品规格：25管/24样    
储存条件：低温保存
注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C的氧化，并终把电子传递给氧，生成水。

测定原理：
还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：
试剂一：25mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二： 5mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：0.5 mL×1瓶，-20℃保存；
试剂四：液体10mL×2瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×2支，-20℃保存；
试剂六：粉剂×2支，-20℃保存；





测定步骤：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定

（1）工作液的配制：临用前取试剂四、试剂五、试剂六各一支，将试剂五和试剂六依次转移到试剂四中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2）将工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；

（3）在1mL玻璃比色皿中加入80μL样本和800μL工作液，混匀，记录550nm处初始吸光值A1和 37℃反应30min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

注意点：

1. 若ΔA大于0.2，需将样本用试剂二稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数），使A1-A2小于0.2，可提高检测灵敏度。

动物肝脏样本由于酶活性过高， 1分钟内吸光值就会到达平台期，务必先进行2个样本的预测定。可将样本用试剂二稀释10~50倍，反应时间缩到到30秒或1分钟（计算公式中代入实际反应时间，并乘