硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒_可见分光光度法

硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒_可见分光光度法
测定方法：可见分光光度法
产品规格：50管/48样    
储存条件：低温保存
注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
TPX属于过氧化物酶家族，在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用，功能与GPX类似，也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。TPX普遍存在于各种生物体内，如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌，在进化上高度保守。TPX与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。TPX的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。

测定原理：
TPX催化H₂O₂氧化二硫苏糖醇（DTT），H₂O₂的吸收波长为240nm，通过测定240nm吸光度的下降速率，即可计算出TPX活性。

自备仪器和用品:
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水

试剂组成和配制:
试剂一：液体50mL×1瓶，室温保存。
试剂二：液体50mL×1瓶，- 20℃保存。
试剂三：液体5mL×1瓶，4℃。





粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。

TPX测定操作：
1. 分光光度计预热30min，调节波长到240 nm，蒸馏水调零。
2.试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴预热30 min。
3.取1mL石英比色皿，加入20 μ L上清液，900 μ L试剂二，80 μ L试剂三，迅速混匀后于240 nm测定10 s和130 s吸光度，记为A1和A2。