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- 2025年07月13日
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1000
- 英文名：
SDS-PAGE loading buffer,5×(with DTT)
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1年
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远慕生物
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-20℃
英文名称:SDS-PAGE loading buffer,5×(with DTT)
储存条件:建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期1年
单位:支
5×蛋白上样缓冲液(含DTT)产品简介:
本产品适用于SDS-PAGE(SDS-变性聚丙烯/酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS,DTT,溴酚蓝,缓冲盐溶液等。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂,可大概指示电泳结束的时间。
5×蛋白上样缓冲液(含DTT)使用说明:
1、请按每40微升蛋白样品加入10微升上样缓冲液的比例(5倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。
2、混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。
3、冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。
5×蛋白上样缓冲液(含DTT)注意事项:
1、聚丙烯/酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右, 胶浓度为12%时,约在20kd左右,胶浓度为15%时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。
2、本试剂因含DTT,有一定的毒性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3、蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、诊断或,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
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文献和实验-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
核蛋白提取： （1）5 millions个离心收集 （2）弃上清，细胞沉淀重悬于1.5ml冰预冷的PBS缓冲液，4℃下2000 rpm离心5min。 （3）弃上清，沉淀重悬于500μl冰预冷的Buffer A离心收集，再悬于0.5 ml Buffer A。 （4）冰上放置10分钟，加入NP40使终浓度为0.5%，混匀后，轻摇20秒。 （5）4℃下1330×g离心15分钟得到细胞核。 （6）重悬于50µl Buffer B，于冰上强烈振荡15分钟，4℃下16300×g离心10分钟
tris-Cl, PH 7.4, 0.25 mM DTT, 10 mM CaCl2；PAD 缓冲液：推荐配方为 0.1M tris-Cl, PH 7.4, 5 mM DTT, 10 mM CaCl2, 10 µg/µl aprotonin, 10 µg/µl leupeptin, 10 µg/µl pepstatin；4×Laemelli 样品缓冲液：推荐配方为 8% SDS，40% Glycerol，250 mM tris-Cl, PH 6.8，0.02% Bromophenol Blue
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