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过氧化氢酶活性检测试剂盒(紫外
110T/100S
Catalase (CAT) Activity Assay Kit (Ultraviolet Absorption Method)
6个月
北京盒子生工
2-8℃
【Boxbio】过氧化氢酶活性检测试剂盒
过氧化氢酶(CAT)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是生物演化过程中建立起来的生物防御系统关键酶,其主要功能是催化生物体内的H₂O₂分解,使机体免受自由基损伤,在活性氧清除系统中具有重要作用。
H₂O₂在240 nm处具有特征吸收峰,过氧化氢酶能够分解H₂O₂,使反应溶液240 nm处吸光值随反应时间而下降,根据吸光值的变化率即可表征过氧化氢酶的活性。
测定过程中所需要的仪器和试剂:紫外分光光度计、1 mL石英比色皿(光径10 mm)、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备(可根据预实验结果适当调整样本量及比例)
①细菌或细胞:离心收集细菌或细胞到离心管内,按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为(500-1000):1的比例(建议500万细菌或细胞加入1 mL提取液)处理样品,冰浴超声破碎(功率20%或200 W,超声3 s,间隔10 s,重复30次),4℃ 8000 g离心10 min,取上清置冰上待测。
②组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:(5-10)的比例(建议称取约0.1 g组织,加入1 mL提取液)处理样品,冰浴匀浆,4℃ 8000 g离心10 min,取上清置冰上待测。
③血清(浆)、培养液等液体样本:直接检测或适当稀释后再进行检测。
注意事项
①反应过程气泡过多表明酶活性过高,结果可能为负值,建议将粗酶液使用提取液适当稀释后再进行测定;若稀释样本或反应体系没有产生气泡仍然出现较小的负值,说明该样本测不到CAT活性;
②若吸光值超过3,请检查比色皿是否为石英比色皿;
③若ΔA大于0.2建议将粗酶液使用提取液适当稀释后再进行测定,控制ΔA小于0.2能够确保反应过程曲线呈良好线性,以提高检测准确性和灵敏度;
④为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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