- ￥180
- BOXBIO
- AKAO003-1M
- 北京
- 2025年07月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
110T/100S
- 英文名：
Catalase (CAT) Activity Assay Kit (Ultraviolet Absorption Method)
- 保质期：
6个月
- 供应商：
北京盒子生工
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
110T/100S
【Boxbio】过氧化氢酶活性检测试剂盒
过氧化氢酶（CAT）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物演化过程中建立起来的生物防御系统关键酶，其主要功能是催化生物体内的H₂O₂分解，使机体免受自由基损伤，在活性氧清除系统中具有重要作用。
H₂O₂在240 nm处具有特征吸收峰，过氧化氢酶能够分解H₂O₂，使反应溶液240 nm处吸光值随反应时间而下降，根据吸光值的变化率即可表征过氧化氢酶的活性。
测定过程中所需要的仪器和试剂：紫外分光光度计、1 mL石英比色皿（光径10 mm）、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）
①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞到离心管内，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为（500-1000）：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1 mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎（功率20％或200 W，超声3 s，间隔10 s，重复30次），4℃ 8000 g离心10 min，取上清置冰上待测。
②组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取约0.1 g组织，加入1 mL提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃ 8000 g离心10 min，取上清置冰上待测。
③血清（浆）、培养液等液体样本：直接检测或适当稀释后再进行检测。
注意事项
①反应过程气泡过多表明酶活性过高，结果可能为负值，建议将粗酶液使用提取液适当稀释后再进行测定；若稀释样本或反应体系没有产生气泡仍然出现较小的负值，说明该样本测不到CAT活性；
②若吸光值超过3，请检查比色皿是否为石英比色皿；
③若ΔA大于0.2建议将粗酶液使用提取液适当稀释后再进行测定，控制ΔA小于0.2能够确保反应过程曲线呈良好线性，以提高检测准确性和灵敏度；
④为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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文献和实验3. 结果计算： 以1min内A240 减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。 过氧化氢酶活性(u/gFW/min)= 式中 A240 = AS0 － AS0 —加入煮死酶液的对照管吸光值； AS1 , AS2 —样品管吸光值； Vt—粗酶提取液总体积（ml）； V1 —测定用粗酶液体积（ml）；
化作用——氧分子、过氧化氢、氧自由基 5. 表面活性剂和去污剂 6.变性剂——脲和盐酸胍、高浓度盐、螯合、有机溶剂 7. 重金属离子和巯基试剂 8. 热 9. 机械力 10. 冷冻和脱水 11. 辐射 5. 酶活计算 ① 酶活定义 酶的活力单位：酶的1个活力单位是在该酶的最适条件下，在25℃、1 min内催 1μmol的底物转化为产物的酶量。 ② 定时法的计算 将酶与底物在特定条件下孵育，酶促反应开始进行，经过一定时间后，用终止液终止反应，通过化学或生物化学的方法测出底物或产物的总变化量，除以时间即可
的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例) TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤 1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应
