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- 详细信息
- 用户评价
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
武汉金开瑞生物工程有限公司
- 服务名称:
单克隆抗体定制
服务简介
与多克隆抗体相比,单克隆抗体针对单一的抗原表位,具有特异性更强,灵敏度更高的特点。使用单克隆抗体可免除不同细胞及微生物种或株间血清学上的交叉反应,大大提高诊断的特异性及敏感度。同时,单克隆抗体在研究细胞表面标志、提纯可溶性抗原、进一步研究抗体的结构和功能、抗体药物研究等方面都起到十分重要的作用。
服务流程
服务优势
- 一站式:可提供从基因合成、抗原表达到抗体制备的一站式抗体服务;
- 大规模:提供最专业的单克隆抗体大规模生产服务,满足诊断级大量生产的需求;
- 质控严:提供ELISA. WB. IHC等基础试验及化学发光、胶体金、胶乳增强免疫比浊等临床诊断的应用型抗体定制
客户提供
- 重组蛋白:至少2-3 mg,蛋白纯度大于90%,浓度不低于0.5 mg/mL,蛋白分子量大于10kDa;
- 多肽:裸肽1 mg,偶联KLH/BSA/OVA或其他载体蛋白3-4 mg,裸肽纯度大于90%,序列长度不少于10个AA;
- 病毒/细菌/胶条/天然蛋白等抗原类型请具体咨询,另外也可选择由金开瑞制备抗原。
最终交付
- 2-5株杂交瘤细胞株和最好1株提供5-10 mg腹水纯化的抗体;
- 鉴定报告,包括小鼠血清效价,杂交瘤的构建(融合率、阳性率)、杂交瘤的克隆化、杂交瘤培养上清液的抗体特异性检测,以及杂交瘤诱生腹水的ELISA效价检测,并根据客户的需求,提供抗体验证结果,如WB、IP、IF等。
服务内容
- 内源验证型单抗定制
- 小分子单抗定制
- 科研/诊断ELISA抗体对定制(试剂盒开发)
- 重组抗体定制(即基因工程抗体,含单链抗体、双特异性抗体 、人源化抗体等)
- 修饰化单克隆抗体定制
服务说明
| 服务流程 | 交付结果 | 服务周期 | |
| 抗原分析及设计 | 免疫原序列 | 1 个工作日 | |
| 抗原制备 | 重组蛋白制备 | 表达克隆测序报告 | 4-7周 |
| 多肤合成及偶连 | MS 和HPLC 质控报告 | 3-4周 | |
| 动物免疫 | 免疫前血清 50ul | 6-8周 | |
| 效价检测 | 抗血清ELISA 及 WB 检测结果 | 1-2 工作日 | |
| 融合 | / | 1 个工作日 | |
| 亚克隆筛选 | 根据客户需求给予中间亚克隆检测结果 | 4-8周 | |
| 定株克隆亚型鉴定及抗体纯化验证 | 筛选出< 20 株高亲和力的杂交瘤细胞培养上清寄送给客户验证, | 2-3周 | |
| 以便客户淘选出更多应用需求的单克隆抗体,沟通确认后进行抗体纯化及最终验证 | |||
| 结题报告发货及最终发货 | 发货前发送结题报告,包含定制过程中所有原始数据、图片及质控报告, | 3-5工作日 | |
| 双方确认后,按照合同约定的所有内容进行交付 | |||
案例展示
项目背景
- 客户提供:质粒模板;
- 项目要求:抗体可以做内源样本的WB
制备流程
1、抗原制备
根据目标蛋白的序列分析结果,选择合适的表达载体及宿主进行重组表达及纯化,该项目我们最终选用大肠表达系统,放大制备抗原。
2、抗体制备
2.1 免疫:2种方案,免疫8只BalB/C小鼠,效价如下:
| PA1-1704001-**蛋白三免效价 | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 稀释度 | 1-左 | 1-右 | 1-中 | 1-无 | 2-左 | 2-右 | 2-中 | 2-无 | 空白血 |
| 1/1000 | 2.7311 | 2.8809 | 2.8325 | 2.856 | 2.981 | 2.856 | 2.8325 | 3.2662 | 0.6045 |
| 1/2000 | 2.6592 | 2.953 | 2.758 | 2.6977 | 2.886 | 2.7488 | 2.7966 | 3.0321 | 0.3088 |
| 1/4000 | 2.6467 | 2.8027 | 2.7082 | 2.9085 | 2.8027 | 2.7912 | 2.9085 | 3.2918 | 0.0952 |
| 1/8000 | 2.7585 | 2.8302 | 2.9589 | 2.8531 | 2.7681 | 2.8531 | 2.9741 | 3.1203 | 0.095 |
| 1/16000 | 2.7819 | 2.837 | 2.837 | 2.7239 | 2.837 | 2.8867 | 2.837 | 3.2912 | 0.0399 |
| 1/32000 | 2.438 | 2.7804 | 2.6835 | 2.7592 | 2.6582 | 2.6749 | 2.7293 | 3.0023 | 0.0242 |
| 1/64000 | 2.0077 | 2.4377 | 2.4713 | 2.1855 | 2.3734 | 2.3577 | 2.3655 | 2.6948 | 0.0076 |
| 1/128000 | 1.2849 | 2.0094 | 2.1806 | 1.5955 | 1.5993 | 1.9036 | 2.0281 | 2.4623 | 0.012 |
| PA1-1704001-**蛋白四免效价 | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 稀释度 | 1-左 | 1-右 | 1-中 | 1-无 | 2-左 | 2-右 | 2-中 | 2-无 | 空白血 |
| 1/1000 | 2.835 | 2.8443 | 2.8943 | 2.835 | 3.1453 | 2.916 | 3.0599 | 2.8366 | 1.254 |
| 1/2000 | 2.6964 | 2.7657 | 2.8584 | 2.9502 | 2.9376 | 2.9502 | 2.8482 | 2.9124 | 0.883 |
| 1/4000 | 2.7976 | 2.8283 | 2.7878 | 2.8178 | 3.0261 | 2.8613 | 3.0431 | 2.9992 | 0.3678 |
| 1/8000 | 2.7034 | 2.8075 | 2.7034 | 2.8655 | 2.8553 | 2.876 | 2.8453 | 3.1467 | 0.0801 |
| 1/16000 | 2.5778 | 2.6528 | 2.7674 | 2.8014 | 2.8014 | 2.8582 | 2.8788 | 3.0167 | 0.0963 |
| 1/32000 | 2.5072 | 2.6615 | 2.6189 | 2.5749 | 2.7381 | 2.7381 | 2.7232 | 2.9619 | 0.0437 |
| 1/64000 | 2.3246 | 2.5952 | 2.5054 | 2.4474 | 2.5249 | 2.6319 | 2.5506 | 2.5236 | 0.0306 |
| 1/128000 | 1.8411 | 2.4785 | 2.2799 | 1.9458 | 2.2455 | 2.3142 | 2.2455 | 2.0905 | 0.04 |
2.2 融合以及筛选:加强3天后,项目融合,采用液体和半固体相配合的模式,挑取有效克隆1500多个,考虑到客户的最终应用,将天然样本的WB验证提前放到筛选中,挑选出高特异性、强反应度的细胞株进行接下来的亚克隆,直至最终获取了6株可在WB中很好识别客户样本的细胞株并进行接下来的稳定筛选。
2.3 亚克隆阶段验证结果
2.4 腹水制备及抗体纯化
小结
该项目进展较顺利,整个项目历时20周。客户提供项目序列信息及克隆质粒,由金开瑞进行抗原设计、蛋白表达纯化、抗体筛选及抗体验证等一系列工作,最终筛选出可识别內源性样本的单克隆抗体,远远超出客户预期。其次制备阶段,针对节点性的数据我们会及时跟客户沟通,使其对整个项目的进度了如指掌,通过此项目的合作,与客户建立了长期合作的良好关系。
- 引用文献
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单克隆抗体相比于多克隆抗体,具有哪些优势:
-
高特异性:单克隆抗体由单一B细胞克隆产生,仅针对一个抗原表位,因此具有极高的特异性,能够精确识别目标抗原,减少非特异性结合的风险。
-
均一性:由于来源于单一克隆,单克隆抗体的理化性质和生物学活性高度一致,这使得实验结果更加可预测和重复性更好。
-
大规模生产:通过杂交瘤技术或噬菌体展示技术,单克隆抗体可以在体外无限增殖,实现大规模生产,满足临床治疗和诊断试剂盒的高标准需求。
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低副作用:因其高度特异,单克隆抗体在治疗应用中能更精准地靶向病灶,减少对正常组织的损伤,降低副作用。
-
多功能应用:单克隆抗体不仅用于疾病的诊断(如ELISA、免疫组化),还因其高专一性被开发成“生物导弹”,用于药物导向治疗(如抗体偶联药物ADC),以及免疫检查点抑制剂等新型疗法。
-
稳定性:单克隆抗体的结构和功能较为稳定,适合长期存储和复杂条件下的使用。
-
定制化:通过基因工程技术,可以对单克隆抗体进行人源化改造,进一步减少人体免疫系统的排斥反应,提高治疗的安全性和有效性。
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文献和实验1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交瘤细胞既可产生抗体,又可无性繁殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体,由于每种抗原都有几个抗原决定簇,用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体,即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来
1. 杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存。2. 单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。
指仅对一种抗原决定基的纯粹的抗体。这类抗体不可能通过将抗原 胞的 Hybridoma,在试管内制成了纯粹的单克隆抗体。用某种抗原使动物产生免疫感应,对应于抗原之不同部分可制成各种不同的抗体复合体。然而,因为一个产生抗体的细胞,只能产生一种抗体,所以骨髓肿瘤细胞与产生抗体细胞间的细胞杂种,可形成边产生抗体边增殖的 hybridoma,将每个杂种细胞进行克隆(无性繁殖系)培养,则一个克隆的细胞群只由单种类产生同一抗体的细胞所组成,这样得到的就是单克隆抗体。此抗体在测定
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