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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
999
- 英文名:
RAPA3G Probe qPCR MasterMix
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海酶联生物科技有限公司
- 保存条件:
避光低温保存
- 规格:
1ml/5ml
| 规格: | 1ml | 产品价格: | ¥450.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 5ml | 产品价格: | ¥1200.0 |
描述:
RAPA3G Probe qPCR Mix 将热启动 RAPA3G DNA聚合酶、反应 Buffer、dNTP 染料等试剂预混在一起,是一种 2×浓度的单组分预混试剂。该制品不含有 ROX 校正染料,适用于各种荧光标记探针,并且适用于各种定量 PCR 机型。优化的反应缓冲液,使得该制品可用于 1~2 重的探针法定量PCR。
制品中的 RAPA3G DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶,其具有的杂质耐受性,其对乙醇、胍盐、肝素、血清、植物多糖多酚具有极高的耐受性,因此可用于粗样品的直接定量 PCR 检测(Direct PCR)。该酶经化学法修饰,在 50℃以下 无活性,只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性 PCR 扩增,极大的提高了 PCR 扩增特异性。
储存:
请避光置于-20℃以下可保存3年。该试剂经 30 次冻融后性能无下降,因此不使用时请置于-20℃避光保存。
操作方法
1、按照如下组分配制 20 μl PCR 反应体系:
2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法,程序如下:
3. 在多数情况下,采用两步法程序可获得理想的扩增效果,在无法达到预期理想效果的情况下,也可采用三步法 PCR程序,程序如下:
4. 反应结束后确认 Real-Time PCR 的扩增曲线和标准曲线。
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文献和实验。G. 反应体系的设置:A-G这五个步骤简单设置好,可以保存,修改反应程序或者立刻进行反应。需要注意一点ABI仪器需要加ROX参比染料,默认的是ROX。有些公司是把ROX或者其他染料配制在MasteMix里面;也有的是单独分开。要根据不同公司的MasterMix进行这一个步骤的选择。BioTeke的MasterMix里没有参比染料,所以选择“none”。设置好之后,就可以把配置好的PCR管放进仪器,点击RUN!Real-time qPCR数据分析1. Real-time qPCR常见参数基线
Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
尽量靠在上游引物; 长度 30-45 bp,Tm 比引物高至少 5 ℃; 5』端不要是 G,G 会有淬灭作用,影响定量 四、Real-time qPCR 操作过程 1. RNA 提取和反转录 在抽提 RNA 过程中任一环节的不正确操作都可能导致 RNA 酶的污染。由于 RNA 酶的活性很难完全抑制,预防其污染是十分必要的。在实际的操作中应遵循下面一些原则: 1. 全程佩戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌,可能污染 RNA 的抽提并成为 RNA 酶的来源。培养良好
%,避免引物内含有互补序列,3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段,真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时,首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX(High 还是 Low)!试剂买回来,样也加好了,最后发现不能用在自家仪器上,内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择,如果不想这么麻烦,ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix (Q711)那是极好











