DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)

DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)
       
产品简介：
将DNA 导入细胞的方法很多，采用 DEAE-葡聚糖转染法主要优点是相对简单、快速、同次试验内和不同次实验间的重复性较，该法尤其适用于瞬时转染。DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)采用特殊溶剂溶解，经过滤除菌，临用前 37℃保温并充分混匀。




操作步骤(仅供参考)：
1、取对数生长期的细胞，制备成细胞悬液。将细胞密度调整到 5×105 个/ml 接种至 6 孔板，培养 12～24h。
2、用蒸馏水或 TE 将质粒 DNA 稀释至 0.1～1μg/μl，将 DNA 溶液直接加到转染培养液至其终浓度为 1.0μg/ml。
3、将 DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)预热至 37℃并颠倒混匀，加到 DNA/转染培养液使DEAE-葡聚糖终浓度为 100μg/ml，适浓度需要自行摸索。
4、将 50～70%汇片的细胞培养物中的培养液轻轻吸出，换上适合体积的 37℃的补充有DEAE-葡聚糖/DNA/转染培养液，37℃孵育 4h。
5、倒置显微镜下观察细胞，细胞内会出现颗粒，有的细胞核出现固缩，有的细胞边缘出现部分破碎。有效的 DEAE-葡聚糖转染常伴有 25～75%的细胞死亡。
6、换用 100mmol/L 氯喹培养液继续培养，进行下游实验。

注意事项：
1、某些特点细胞需要较长的转染时间，因为氯喹有细胞毒性，可在转染的后时期加入。
2、转染时，摇动细胞可保障转染效率均一，适转染时间需通过实验确定。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。