产 品 说 明 书 X-Green II 双链 DNA 定量试剂盒 产品货号:XY2033S,XY2033L 产品规格:200T,2000T 产品内容: 产品 X2033S(200T) X2033L(2000T) 浓度 组分 A:X-Green II 0.1 mL 1 mL 溶于有机溶剂 组分 B:20×Buffer 2 × 1.25 mL 25 mL 20× 组分 C:dsDNA 标准液 0.1 mL 1 mL 100 μg/mL
储存条件 4℃避光保存,有效期见外包装。对于长期储存,20×Buffer 和 dsDNA 标准液可以储存在≤-20℃。 产品参数 Ex/Em:480/520 nm(结合 dsDNA) 产品介绍 X-Green II是荧光检测dsDNA并进行定量的一种产品, 这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术:cDNA文库的 构建、亚克隆的DNA片段纯化及应用,比如进行DNA定量、 产物扩增和引物的进一步检测。常规的DNA含量的检测方 法是在260 nm处测其吸光值。 这种方法的主要缺点是核苷酸、 单链核酸和蛋白质对信号的影响很大, 并且还会受到核酸制 备过程中污染物的干扰,无法区分DNA和RNA,而且这种 方法不灵敏(5 μg/mL dsDNA溶液A260=0.1)。X-Green II定 量方法简单、方便,成为生物制品残留DNA检测的标准。 X-Green II只有与dsDNA结合后才发出荧光,并且所发 荧光强度与DNA浓度成正比。X-Green II双链DNA定量试剂 盒可以检测出25 pg/mL-1000 ng/mL范围内的dsDNA,且线 性关系较好(R2 >0.99)。 使用方法 试剂制备 X-Green II是以1 mL的浓缩液形式保存在有机溶剂中。 实验时, 配制2×X-Green II工作液: 将组分A用1×Buffer(组 分B稀释20倍)按1:200的比例稀释。对于终体积为2 mL的 检测体系,如需准备足够20个样品测定的工作液,可在20 mL 1×Buffer中加入100 μL组分A;对于终体积为200 μL的 检测体系,如需准备足够20个样品测定的工作液,可在2 mL 1×Buffer中加入10 μL组分A。 由于试剂容易吸附到玻璃 表面,要在塑料容器中配制。组分A试剂见光易降解,因 此要注意避光保存。 溶液最好在配制好的数小时内使用, 以保证最佳的实验 结果。 实验方法 1. 用无菌水将组分 B 稀释成 1×Buffer。如制备 50 mL 1×Buffer,需要将 2.5 mL 组分B 加入到47.5 mL 无菌水中。 2. 稀释DNA标准品,制作标准曲线。用1×Buffer将组分C由 100 μg/ mL稀释至2 μg/ mL。如取40 μL组分C,加入1.96 mL 无菌水。对于低浓度的标准曲线,可以把2 μg/mL的DNA标 准品稀释40倍, 制备50 ng/mL的DNA储液,然后再进一步稀 释。具体稀释方法可参照表1、表2。 表 1. 宽线度标准曲线制备 Volume(μL) of Buffer Volume(μL) of 2μg/mL DNA stock Final DNA Concentration in X-Green II Assay 0 1000 1 μg/mL 900 100 100 ng/mL 990 10 10 ng/mL 999 1 1 ng/mL 1000 0 blank 表2. 低浓度标准曲线制备 Volume(μL) of Buffer Volume(μL) of 50 ng/mL DNA stock Final DNA Concentration in X-Green II Assay 0 1000 25 ng/mL 900 100 2.5 ng/mL 990 10 250 pg/mL 999 1 25 pg/mL 1000 0 blank 3. 对于每个未知样品, 将1-10 μL样品与99-90 μL的1×Buffer 混匀,加入微孔板孔中检测。 4. 用1×Buffer按照1:200稀释组分A,制备2×X-Green II工作 液。 对于每个标准品和每个未知样品, 都需要100 μL的体积。 确定要测试的样品和未知样品的总数,并将该数值乘以100 μL,即为所需稀释的X-Green II试剂的总体积。X-Green II 对光敏感,融化和稀释时要注意避光操作。 5. 添加100 μL稀释的X-Green II工作液到每个标准和样品 孔。吹吸三次混匀。 6. 用锡箔纸覆盖微板,并在室温下孵育5 min。 7. 读取数据, 取平均值生成标准曲线, 并确定未知样品DNA 的浓度。 注意事项: 1. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧 光淬灭。 2. X-Green II工作液最好现配现用,以保证最佳结果。 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 本产品仅用于科研。 相关产品 :