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现货
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拓赫机电
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文献和实验EDTA (pH8.0)。 (2)[γ-32 P] ATP(比活性7000Ci/mmol; 10mCi/ml)。 (3)T4 多核苷酸激酶(10 单位/ml)。 4、操作步骤: (1)100ng 寡核苷酸溶于30ml 水中。置65℃变性5 分钟,迅速置冰溶中。 (2)立即加入下列试剂: 10×激酶缓冲液5ml [g-32P]ATP(比活性7000Ci/mmol;10mCi/ml) 10ml T4 多核苷酸激酶2ml 加水至50ml 混匀后置37℃水浴20 分钟
1ml Trizol液研磨,注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。 2、研磨液室温放置5分钟,然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管,用手剧烈摇荡离心管15秒。 3、取上层水相于一新的离心管,按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇,室温放置10分钟,12000g离心10分钟。 4、弃去上清液,按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇,涡旋混匀,4℃下7500g离心5分钟。 5、小心弃去上清
,点于玻璃纤维滤纸,室温干燥, 这些样品代表总放射性活性。 (2) 同样各取3μl中反应液至含有100μl(1mg/ml)鲑鱼精DNA中,混匀,加入0.5ml 5% TCA, 涡旋混合仪混合后置冰上5-30分钟。 (3) 用玻璃纤维滤纸过滤,用冰冷的5% TCA洗三次,每次用5ml TCA,再用5ml丙酮或乙醇漂洗, 这些样品代表掺入放射性活性。 (4) 分别测定总放射性活性强度和掺入放射性活性强度,可用盖革计算器,也可用液闪计数。 3. 第一链产量测定 第一链掺入
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