产品介绍 Biolife Green I 效能等同于 Sybr Green I。 Biolife Green I是一种结合于dsDNA双螺旋小沟区域的 具有绿色发射光的荧光染料。 Biolife Green I 与 dsDNA结合 后荧光信号会增强 800-1000 倍,是一种常用的 qPCR 荧光 染料。该染料经济实惠、使用方便,具有高灵敏度,信噪比 高等优势,可应用于基因表达差异分析,基因芯片等。
使用方法 1. 用 DMSO 或dH2O 将10,000×染料进行稀释,如稀释 500 倍得到 20×染料,用于后续实验。 建立如下实验体系:(仅供参考) 名 称 体 积 10×的无 Mg2+聚合酶缓冲液 5 µL 50 mM MgCl2 2.5 µL 2 mM dNTP 5 µL 20× Biolife Green 2.5 µL Taq DNA polymerase 1-5 units F, R Primers 各 0.1-0.5 µM 模板 DNA 适量 dH2O 补足至 50 µL 注:DNA模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同种类的 DNA 模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯 度稀释,确定合适的 DNA 模板添加量。cDNA 作为模板时 的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。 2. 执行实时定量PCR 程序,采集荧光信号。 程序 温度 时间 循环 酶激活 95℃ 2 min 1 变性 退火 延伸 95℃ 50-60℃ 72℃ 5 s 45 5 s 25 s 3. 分析数据。
注意事项 1. Biolife Green I的使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功 的关键因素。染料浓度过低会使荧光信号变化降低,导致低 拷贝的样品可能无法检出,而在高浓度时又会抑制 PCR 反 应。所以一般在使用 Biolife Green 染料时应根据实际情况优 化使用浓度,反应的终浓度为 1×到 0.2×之间。 2. 提高Mg2+浓度可以降低 Biolife Green I 对PCR 反应的抑 制作用。我们建议在用Biolife Green I进行荧光PCR反应时, Mg2+浓度比无 Biolife Green I 的普通 PCR 反应高出 0.5~3 mM。 3. 为了您的健康,请穿实验服并戴一次性手套进行操作。 本产品仅用于科研 相关产品 :