带封闭管的采样拭子

WB 为何又翻车？

最近师妹开始做 WB 实验了，但是一天又一天重复做，却次次结果不理想。除了没有拿到组会可以汇报的条带外，师妹集齐了所有奇奇怪怪的条带：微笑带，皱眉带，拖尾带，甚至没有条带…… 师妹也因此对我发出了灵魂拷问：「为什么 WB 实验这么容易翻车？」 虽然 WB 是一类基础实验，但是基础并不代表简单。翻车的主要原因在于 WB 的步骤实在繁琐：从配置蛋白胶开始，到蛋白电泳、蛋白转膜、抗体孵育，一整套流程下来花费 1～2 天的时间才能进行最后的显影。这些环节中但凡有一个出错，就会导致实验

WB 实验，你都碰到过哪些奇葩的条带

相信很多人在做 Western blot 实验时，会遇到各式各样奇怪的现象，为了让大家少走弯路，下面就跟大家来分享一下实验过程中会出现哪些现象，是什么原因，如何来解决。以下列举的情况可都是我们的实验员在多次实验中所积累的真实经验，内容文字少，全是干货。1. 出现黑点或黑斑原因：试剂污染，抗体结合到封闭剂解决方法：使用新鲜配置的试剂；过滤封闭液；选用其他类型封闭液2. 条带中出现边缘规则的白圈原因：转膜时膜和胶中间有气泡，或抗体在膜上未均匀分散解决方法：制备转膜凝胶时用玻棒赶去气泡；使用摇床孵育

IHC原理、操作及注意事项

的停留时间，透明的时间也应该控制缩短。对组织浸蜡时，一般选用 56℃~58℃ 熔点的石蜡，浸蜡温度最好不超过 60℃，防止抗原的损失。包埋时应选好角度动作迅速，以便切片时有完整的切面。切片时则要该快则快该慢则慢，及时检查刀片是否出现缺口，防止蜡带出现划痕。 脱蜡和水化 使组织恢复到固定后的正常状态暴露出抗原以方便与一抗结合。若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。 抗原修复 由于组织在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而掩盖抗原