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难成药靶点|蛋白降解|药物筛选
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关于BTK的PROTAC进展很快,在研的项目较多,机理相对清晰,也有对应点突变引起的耐药机制,此处正是PROTAC分子发挥作用的空间,适合早期用于验证PROTAC分子的设计原理。关于BTK的体外实验和体内实验相对完善,主要筛选方法有:
酶学活性的抑制,优化BTK binder的亲和力,也可用SPR, MST, ITC, BLI, REFEYN等技术评价蛋白亲和力、三元复合的形成。细胞水平的的降解可在Ramos,OCI-LY10细胞中进行,根据目前的经验,各种方法如WB、数字化Jess、通量化ICW和IFA等技术,都适合检测BTK和pBTK水平,得益于优质的抗体,对于通量的筛选,也有构建HiBiT敲入的细胞系,快速的筛选可降解BTK蛋白的PROTAC分子,对应细胞增殖的结果也相对清晰。
机制研究上可以通过ADME的方法、蛋白组学、结构生物学等手段,评价PROTAC分子在细胞内发挥作用的机制,也可以通过抑制剂的手段研究蛋白降解通路的特异性等等。针对更新的BTK突变,还有很多工作需要进行.
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