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Sarstedt
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文献和实验PCR条件对反应的影响变性温度与时间模板变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链DNA模板，PCR也就不会启动。变性温度低则变性不完全，DNA双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况下可设为94℃20-30秒，高温时间应尽量缩短，以保持耐热DNA聚合酶的活性，最高变性温度不宜超过95℃。退火温度与时间退火温度决定PCR特异性与产量。温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物
BEST" PCR conditions for amplifying DNA from plasmids 25 ng linear template (~6.5 kb) 50 pmol each primer 100 pmol each dNTP 1X Promega Taq buffer (no Mg++) 1.5 mM MgCl2 1 U Taq DNA polymerase in 50 ul final 92°C
1、PCR reaction system: 25 ng linear template (~6.5 kb) 50 pmol each primer 100 pmol each dNTP 1X Promega Taq buffer (no Mg2+) 1.5 mM MgCl2 1 U Taq DNA polymerase in 50 ul final volume2、PCR programme: 92°C / 2' 92°C
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