BL21（DE3）大肠杆菌,Escherichia coli

菌种名：BL21（DE3）大肠杆菌
拉丁名：Escherichia coli BL21（DE3）
菌种编号：SHBCC D24923
其他编号：BL21（DE3）
模式菌株：非模式菌株
主要用途：科研
具体用途：基因工程表达宿主菌，T4噬菌体宿主菌
生物危害程度：四类
培养基名称：营养肉汁琼脂
培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。推荐使用商品化成品培养基。
培养温度：37℃
需氧类型：好氧
保存方法：真空冷冻干燥法
提供形式：冻干物
分离来源：
备注：

感谢您使用上海保藏生物技术中心（SHBCC）提供的微生物菌种。本中心目前有标准菌种（斜面、甘油菌、穿刺菌和冻干粉四种形式）、基因工程菌种（斜面、甘油菌和穿刺菌三种形式）、食用益生菌和工业发酵菌种，基本涵盖了环境、工业、农业、分析、食品、药用真菌等各类生产和科研微生物。
保存条件
斜面、穿刺菌和冻干粉可常温运输，但应在4-10度长期保存。甘油菌可常温运输，但应在-80度长期保存。微生物菌种应保存于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退。
好氧菌冻干粉使用说明：
冻干粉首次活化，将菌粉甩至底部，将尖头一侧用酒精消毒后敲开，取0.2-0.3ml溶解液加入至菌种管中，轻轻弹至菌粉混合均匀，用无菌吸头全部吸出溶解液，全部接种至2支斜面上培养。注意真空菌种管一旦敲开里面的冻干粉就必须全部被用掉，留着也没用。
兼性厌氧菌冻干粉使用说明：
冻干粉首次活化，将菌粉甩至底部，将尖头一侧用酒精消毒后敲开，取0.2-0.3ml溶解液加入至菌种管中，轻轻弹至菌粉混合均匀，用无菌吸头全部吸出溶解液，全部接种至2支含3ml液体培养基的试管中，静置培养。注意真空菌种管一旦敲开里面的冻干粉就必须全部被用掉，留着也没用。
厌氧菌冻干粉使用说明：
冻干粉首次活化，将菌粉甩至底部，将尖头一侧用酒精消毒后敲开，取0.2-0.3ml溶解液加入至菌种管中，轻轻弹至菌粉混合均匀，用无菌吸头全部吸出溶解液，全部接种至2块含培养基培养皿上培养(注意培养皿不能用封口膜封住盖子四周)。注意真空菌种管一旦敲开里面的冻干粉就必须全部被用掉，留着也没用。
冻干管的开启方法：
（1）滴水破开法
  首先将冻干粉甩至底部圆球位置，然后用70%的酒精脱脂棉球擦净冻干管，将冻干管的尖端（注意不是圆球端）放在火焰上加热。然后迅速滴几滴无菌水至加热处，此时冻干管的尖端会自动破开。最后用镊子轻轻敲下冻干管尖端，并将冻干管开口处在火焰上加热灭菌一下，并且保持下面的菌种菌种活化步骤在火焰旁操作。然后逐渐敲开冻干管，直至适当位置。（敲开位置以可以很好注入无菌水以及吸取混匀后的液体为准）
（2）直接敲开法
   首先将冻干粉甩至底部圆球位置，然后用70%的酒精脱脂棉球擦净冻干管，将冻干管的尖端（注意不是圆球端）放在火焰稍微加热灭菌。然后直接用大镊子敲打尖端，敲开后将破口处在火焰上加热灭菌一下，并且保持下面的菌种菌种活化步骤在火焰旁操作。 然后逐渐敲开冻干管，直至适当位置。（敲开位置以可以很好注入无菌水以及吸取混匀后的液体为准）。
冻干粉菌种复苏中注意事项：
（1）菌种活化前，如要长期保藏，可将冻干管放在-20度条件下保存。
（2）此冻干菌是经冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能剩菌粉下次使用。
（3）冻干管中大部分是用牛奶做保护剂，菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接种在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。
（4）冻干粉是在冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长出，请继续在相应的环境下多培养24小时或更长时间，直至菌种培养出。
（5）正常情况下，菌种是需要培养2代后才会具备稳定的活性，所以建议做2次继代培养后才能用于您后续的实验。
（6）打开冻干管应在专业的微生物专业人员才可操作，注意生物危害程度为三级的菌种应在生物安全柜中操作。其中标准菌种可以在超净台中操作，并且做好个人防护。开管时要注意做好个人面部防护，防止碎片飞入眼中。
（7）以上开管操作都应该在安全柜或超净台中操作，并且操作完后所有器皿都要经灭菌后再销毁。
磁珠菌种使用说明：
（1）在无菌的条件下，打开瓶盖并使用灭菌的接种棒或镊子移出一个小珠，盖好瓶盖并尽快放回低温保存。过度改变温度会减少生物生存能力。
（2）小珠可直接使用接种在固体培养基培养皿上，盖上培养皿盖，等待10分钟待磁珠内部菌种解冻，倾斜培养皿以滚动磁珠，使磁珠在培养皿表面滚动，滚动到的地方则接种了菌种。或者 小磁珠可加入至100-200ul液体培养基中，震荡摇晃几次，然后用无菌吸头吸取上述液体培养基至培养皿上，涂布均匀即可。
定量冻干粉菌种使用说明：
冻干粉首次活化，沿着铝塑盖箭头方向打开塑料盖，然后轻轻撕开，去除铝盖，然后轻轻打开橡胶塞盖，准确取1ml溶解液加入至西林瓶中，盖上橡胶塞盖，上下颠倒混合均匀，用无菌吸头取0.1ml涂布到含培养基培养皿上，培养2-3天。注意真空菌种管一旦敲开里面的冻干粉就必须马上用完，如果冷藏定量可能会有误差或可能出现染菌。
定量孢子悬液使用说明：
（1）从冰箱拿出孢子悬液，室温解冻后，摇匀。
（2）用75%酒精擦拭西林瓶盖，酒精灯上灼烧消毒后，撕开西林瓶铝盖。
（3）用无菌的吸头或者无菌的滴管吸取一定量的孢子悬液，直接喷雾于样品表面。如果孢子悬液需要稀释，可以用无菌的0.9%的生理盐水直接稀释后直接喷雾于样品表面。
关于 冻干粉 磁珠菌种 甘油菌 斜面菌 定量菌液 的说明：
我本中心的菌种有冻干粉、磁珠菌种、甘油菌、斜面菌和定量菌液等几种形式：
1、冻干粉：冻干粉菌种为菌种与脱脂奶粉溶液混合后，加入到真空冻干管里，经真空冻干制成。因菌种里面真空并且已经休眠，因此一定要按照本中心提供的说明书步骤进行活化。活化之后的菌种需要再传代2次，活力达到最佳。建议每代菌种都要做成甘油菌进行超低温-80度冻存（厌氧菌需要在液氮条件下储存）。冻干粉菌种可以常温运输，我们运输中会加入冰袋。收到后不开管可以在冷藏条件下保存3-15年。如果开管，就要马上全部用完。
2、磁珠菌种：磁珠菌种为1代菌液与磁珠混合后，菌种充分被磁珠吸附。磁珠菌种含有12颗，可以使用12次。运输时候我们加入冰袋运输，收到后需要超低温-80度冻存。
3、甘油菌：甘油菌为做好的菌悬液与50%的甘油等体积混合后做成的形式，里面甘油浓度为20-25%。正常可以常温运输。收到菌种后可直接吸取100-200 μL 甘油菌接种到液体培养基中扩大培养。可室温保存，保存周期约为1周，也可-20℃保存，保存周期约为1年；也可以-80℃保存，保存周期3年。
4、穿刺菌：穿刺菌为用接种针接种好菌种后插入到固体培养基中，经培养后，会在接种针穿刺的地方形成明显的穿刺线，收到该形式菌种后可挑取穿刺线上的菌接种到相应的培养基中，一定温度培养即可。可在4℃保存一个月。
5、定量菌液：定量菌液一般为工作菌种（常规为三代）定量成客户要求的浓度，一般情况下是现配现发货。运输的时候我们会加入冰袋运输，收到后可以4-10度保存1周，-20度保存1-4个月。