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江苏天净沙
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2ug
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文献和实验作用。KM71没有AOX1基因,本身就是Muts,因此转化后所有的转化子都是Muts,不必鉴定表型。Invitrogen公司构建的多种P.Pastoris表达载体,既有胞内表达的,又有分泌表达的。这些载体都包括一个表达盒(cassette),它是由0.9 kb的5 ‘A0X1序列片断和约0.3 kb的转录终止基 因的3’序列组成。分泌型表达载体主要有pPIc9,pPIc9k,pHIL-S1,pPIcza,pYAM75P6;胞内表达的载体主要有:pHIL-D2,pA0815,pPIC3K,pPICZ
的酿酒酵母的分泌信号—α交配因子(α-factor)引导序列已经成功地引导了几种外源蛋白的分泌。分泌表达载体主要有:pPIC9,pPIC9K,pHIL-S1,pPICZα A,pYAM75P等。胞内表达载体主要有:pHIL-D2,pA0815,pPIC3K,pPICZ,pHWO10,pGAPZ, pGAPZa(Invitrogen),pPIC3.5K等。工程菌株Y11430,MG1003,GS115 (AOX1),KM71,SMD1168。毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种,都具有
经过不断的努力,终于得到酵母表达阳性结果。特把表达的一些心得写下来,希望对正在努力中的XDJM有所帮助,也以此感谢丁香园对我的帮助。分泌型载体:pPICZaC 宿主菌:X33 培养基:BMGY/BMMY 目的蛋白:20KD1、表达过程中防止污染是第一关键,酵母太容易污染 了。在用BMGY激活培养时,可进行挑单菌落培养24h,而不用常规的1%接种。摇床可定期用75%酒精喷洒消毒。2、如果只是检测用,用试管小量培养。先前用250ml的锥形瓶培养,既浪费材料,又耗费精力。目前表达出来的蛋白就是在试管
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