DIG RNA标记试剂盒(SP6/T7) 111750259

说明

一般描述

试剂盒用于通过SP6和T7聚合酶进行的体外转录而实现基于UTP的RNA标记。通过这种方法，已知长度的单链RNA探针被生成，而这可用于多种杂交技术中。
我们致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品为一种安全的化学品。  DIG系统是灵敏且具有成本效益的方案，可替代放射性标记和放射法检测核酸。有许多已发表论文证明了DIG系统的通用性，因此，使用放射性标记不再是标记用于杂交的DNA的唯一选择。
检测时间：145分钟
样品材料

• 线性化质粒DNA
• PCR产物

原理
DIG RNA标记试剂盒可产生已知长度的DIG标记单链RNA 探针。SP6或T7 RNA聚合酶都可在体外对来自模板DNA（在UTP存在情况下）对这些探针进行转录。
RNA标记通过体外转录完成
待转录的DNA被克隆至含有SP6及T7 RNA聚合酶的合适转录载体的多接头位点（如pSPT 18或19）。相邻的模板DNA在合适的位点进行线性化而RNA聚合酶用于生成“流失的”转录本。DIG-UTP被插入至转录本中。新合成RNA的每个第20至25个核苷酸都是DIG-UTP。由于核苷酸的浓度在标准转录反应中并不会成为限制，该反应可生成大量的标记RNA。

特异性

灵敏度及特异性
DIG标记的RNA探针可在最低至1 μg的哺乳动物DNA中按照以下的检测条件进行单拷贝基因的检测：该杂交混合液包含20至100 ng标记探针/ml，而结合的探针可通过抗DIG-AP进行检测并通过化学发光底物CDP-Star进行可视化。
热灭活：添加 2 μl 0.2 M EDTA (pH 8.0) 终止反应。

应用

用于利用SP6及T7 DNA聚合酶通过体外转录而使用DIG-11-UTP进行RNA标记。DIG标记的“流失”转录本是以高效率进行合成的，并用于多种杂交技术：

• Northern blots
• Southern blots
• 原位杂交
• 菌斑或克隆提升
• RNase保护试验

由于高度特异性和敏感的检测系统，DIG标记的探针可用于1μg 总人类DNA中单拷贝基因的检测。
注意：由于DIG和UTP之间的连接对于碱具有抗性，DIG标记的RNA可通过碱处理进行片段化。略微降低DIG标记的RNA探针的大小可能会使其更为适合于原位杂交中的特定应用。

包装

1个试剂盒包含12种组分。

质量

检测原理：待转录的DNA模板将会被克隆至含有SP6及（或）T7 RNA聚合酶启动子的合适转录载体的多接头位点。当在合适位点进行线性化后，RNA在DIG-UTP的存在下进行了转录。在标准条件下，来自1μg 模板的约10μg的全长DIG标记RNA被转录。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。