- ￥854
- 博尔森/BIOESN
- BES22575KB
- 中国
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Phophatase Alkaline,Calf Intestine(CIPA)
- 保质期：
1 年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1000U
产品储存：2-8℃保存，保质期至少 1 年。
产品说明：
1：碱性磷酸酶来源于牛肠粘膜。
2：牛肠碱性磷酸酶为二聚膜衍生糖蛋白。至少存在三种同工酶，每个单体通常拥有两个 N-连接多糖和一个或多个 O-连接多糖。该酶需要锌以及镁或钙二价离子才能显示活性。
3：单位定义：在 pH 9.8,37℃条件下，一个 DEA 单位可每分钟水解 1 μmole 的 4-基磷酸酯。
（一个甘氨酸单位相当于~3 个 DEA 单位）。
4： 应用：碱性磷酸酶可用于酪蛋白和其他蛋白质的去磷酸化。碱性磷酸酶还可用于 DNA 或 RNA 的5′-末端的去磷酸化，以防止自我连接。经碱性磷酸酶的去磷酸化作用后，DNA 或 RNA 还可被放射性标记磷酸盐标记（通过 T4 多核苷酸激酶）。
5：高浓度的酶稳定性更高。碱性磷酸酶以高浓度母液形式提供，并附赠稀释液（含 Mg2+，Zn2+，甘油等）和 10×反应缓冲液。
产品组成：
使用方法（以之为例）：
1. 在微量离心管中配制 50 μL 反应体系：
（DNA Fragment 1~20 pmol；10×反应液 5μL ；碱性磷酸酶 30U ；补水到 50μL）2. 37℃或 50℃反应 30 分钟。或者先 37℃反应 15 分钟，再 50℃反应 15 分钟。注 意：单链 DNA和具有 5’突出末端 的 DNA 在较低温度下（如 37℃）即可去磷 酸化，而具有 3’突出末端的 DNA 或平末端 DNA 需要较高温度（如 50℃）才能 去磷酸化。
3. 苯酚/氯仿/25：24：1）抽提 2 次。注意：如果早在苯酚抽提之前，用 自备的蛋白酶 K 降解 CIAP 酶，则效果更好。具体做法是：加入 EDTA 和 SDS 使其终浓度为 5 mM EDTA 和 0.5% SDS，最后加入蛋白酶 K 溶液，使其终浓度 为 50 μg/mL，然后 56℃处理 30 分钟，再 75℃孵育 10 分钟。然后用于苯酚/ 氯仿/抽提。
4. 氯仿/（24：1）抽提 1 次。
5. 添加 2.5 μl 的 3 M NaCl（终浓度 150 mM）。
6. 添加 125 μl 的（2.5 倍量）冷乙醇，在-20℃下放置 30～60 分钟。
7. 13000g 离心 20 分钟后，小心去上清。
8. 用 1mL 75%乙醇洗涤一次。
9. 干甩数秒，小心吸弃上清。
10. 用 20 μl 以下的 TE Buffer 溶解 DNA 沉淀待用或放-20℃长期放置。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验CDw78 分子 CDw78 常用单克隆抗体或代号： Leu21,Ba抗原 主要表达细胞： B,Macsub [B] 分子质量(kDa)和结构： p67? 功 能： B细胞活化的辅助蛋白 CDw78 Deleted at 7th HLDA Workshop
Polynucleotide Kinase (EC 2.7.1.78)
The enzyme polynucleotide kinase (PNK, or ATP:5′-dephospho-polynucleotide 5′-phosphatase) catalyzes the transfer of a γ-phosphate group from a 5′-nucleoside triphosphate moiety to a free 5′-hydroxyl of a polynucleotide such as DNA or RNA, to form
一、实验目的 1.掌握酶分离纯化的一般步骤及相关原理； 2.悉碱性磷酸酶的分离纯化的方法步骤。 二、实验原理 有机溶剂分级沉淀是分离蛋白质的常用方法之一。有机溶剂能使许多溶于水的酌生物大分子发生沉淀，其主要作用是降低水溶液的介电常数。例如20℃时水的介电常数为80，82％的乙醇溶液的介电常数为40。溶液的介电常数降低意味着溶质分子间异性电荷库仑引力增加，从而使溶质的溶解度降低
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