- ￥877.40 - 5297.40
- 博尔森/BIOESN
- BES22093KB
- 中国
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
GST Sepharose 4B/ Glutathione Sepharose 4B
- 保质期：
3年
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100mL /10mL /25mL
| 规格： | 100mL | 产品价格： | ￥5297.4 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 10mL | 产品价格： | ￥877.4 |
| 规格： | 25mL | 产品价格： | ￥1787.4 |
产品规格：10 mL/25 mL/100 mL
英文名称：GST Sepharose 4B
产品参数：
基质：4%琼脂糖凝胶
配基：谷胱甘肽
颗粒大小：45-165 μm
最大流速：75 cm/h
工作 pH：3-12
每毫升蛋白结合量：8 mg
产品说明：
Pgex 载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽 S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯 化。Pgex 是一类以谷胱甘肽（γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子 的酶。由于 GST 对底物的亲和力是亚豪摩尔级的，谷胱甘肽琼脂糖对 GST 融合蛋白的结合能力很强，因 此谷胱甘肽固化琼脂糖形成的亲和层析凝胶 GST 及其融合蛋白的纯化效率很高，每毫升柱床体积的凝胶能 结合 8 mg 融合蛋白。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合 GST 融合蛋白，凝胶用 3 mol/L NaCl 的缓 冲液再生。
使用说明：
（一）凝胶处理
1. 轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖凝胶的容器，将凝胶混成匀浆。
2. 取部分匀浆放入 15 mL 离心管（每 100 mL 细菌培养物需要 2 mL 匀浆）。
3. 4℃ 500 g 离心 5 分钟，小心去掉上清。
4. 在凝胶中加入 10 倍柱床体积的冷的 PBS，颠倒数次，混合均匀，4℃ 500 g 离心 5 分钟，小心去掉上清。
5. 每毫升凝胶加入 1 mL 冷的 PBS，制成 50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液放置于冰上待用。
（二）细胞抽提
1. 用 4 mL PBS 悬浮 100 毫升培养基的细胞沉淀。
2. 加入溶菌酶至终浓度 1 mg/mL，冰上放置 30 分钟。
3. 用针筒将 10 mL 的 0.2% TritonX-100 注入细胞裂解物中，剧烈振动数次均匀。
4. 加入 DNase 和 RNase 至终浓度 5 μg/mL，4℃振动孵育 10 分钟。
5. 4℃ 3000 g 离心 30 分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入 DTT 至终浓度 1 mmol/L。
（三）纯化融合蛋白
1. 细胞裂解物与适量 50%谷胱甘肽-琼脂糖凝胶匀浆混合，每 100 毫升细菌培养物加 2 mL 凝胶，于室温轻摇 30 min。
2. 混合物于 4℃以 500 g 离心 5 分钟，小心去掉上清并留样少许进行 SDS 聚凝胶电泳。
3. 沉淀中加入 10 倍柱床体积的冷的 PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与凝胶结合的蛋白。
4. 4℃以 500 g 离心 5 分钟，小心去掉上清并留样少许进行 SDS 聚凝胶电泳。
5. 重复步骤 3 和 4 两次，保留结合 GST 融合蛋白的沉淀。
（四）洗脱或酶解
谷胱甘肽洗脱：
1. 配制谷胱甘肽洗脱缓冲液，10 mmol/L 还原型谷胱甘肽，50 mmol/L Tris-Cl，pH8.0。
2. 沉淀中加入 1 倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动 10 min，洗脱凝胶上结合的蛋白。
3. 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至管中。
4. 重复步骤 2 和 3 二次，合并三次上清。
蛋白酶解：
1. 在结合了融合蛋白的凝胶中加入凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择），每毫升凝胶加入 50 单位蛋白酶（溶于 1 mL PBS）。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时，用小规模预试验确定精确时间。
2. 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心移至新管中。（GST 仍结合在凝胶上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）。
3. 10% SDS 聚凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。
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