LAMP Green™ *50X DMSO 溶液*

简要概述

等温扩增方法以流线型、指数方式提供核酸靶序列的检测。现有成功检测 LAMP 反应的染料大多基于使用比色分析的终点法。 LAMP Green 可以对 LAMP 反应进行实时荧光测量。可以使用普通实时 PCR 仪器上的 SYBR 或 FAM 通道检测染料。 LAMP Green 与琼脂糖凝胶电泳兼容，可以在凝胶上运行并通过凝胶成像仪进行分析。

 

适用仪器

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qPCR
仪器规格：	SYBR 或 FAM 滤波片
荧光酶标仪
Ex(nm):	490
Em(nm):	525
cutoff:	515
推荐孔板：	纯黑色孔板

产品说明书

样品实验方案 

表 1. 25 μL LAMP 反应混合物

成分	DNA/RNA 目标检测	无模板对照（NTC）
LAMP master mix (2X）	12.5ul	12.5ul
LAMP primer mix (10X)	2.5ul	2.5ul
LAMP Green (50X)	0.5ul	0.5ul
Target DNA/RNA	Varies	0ul
ddH2O	Varies	9.5ul
总容积	25ul	25ul

以下方案可用作指导，应根据您的实验需要进行优化

1.在室温下解冻所有要使用的组件并放在冰上。 短暂涡旋混合并离心以收集材料。

2.如表 1 所述制备反应混合物。列出了 25 μL/LAMP 反应的体积。 根据使用情况相应调整体积。 如有必要，可以优化 LAMP Green 浓度。

3.涡旋反应混合物和离心机收集材料。

4.密封反应容器。

5.在 65°C 下孵育 30 分钟。 如有必要，可以延长时间（即，对于低拷贝目标、具有挑战性的样品类型或已知会产生较慢扩增时间的反应）

6.如果使用 qPCR仪，可以使用 SYBR 或 FAM 滤波片实时读取信号。 对于基于酶标仪的检测，在 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff = 515 nm）处测量信号

7.如果在 LAMP 反应完成后分析反应产物，则通过在 >80°C 下加热 5 分钟使酶失活。

注意：LAMP Green 与琼脂糖凝胶电泳兼容，因此可以在琼脂糖凝胶上分析样品。

 

图示

图1. HeLa 细胞中 BRCA1 的 LAMP 检测。 使用 ABI 7500 qPCR 仪将 HeLa 细胞中的 500 ng（绿色）、50 ng（蓝色）、5 ng（橙色）和 NTC（黑色）的 gDNA 用于与 LAMP Green 荧光染料的 LAMP 反应