Brdu溶液(0.5mg/mL)—细胞增殖检测
储存条件: -20℃保存,有效期 1 年。
产品内容:
产品介绍:
BrdU,英文全称 5-bromo-2′-deoxyuridine,中文全称 5-溴-2’-脱氧尿苷,是一种合成的胸苷溴化类似物,在 S 期可替代胸苷选择性插入细胞 DNA。BrdU 通常和广泛用于测定 DNA 合成和标记分裂细胞,最后用来研究诱导细胞增殖的信号通路和其他生理过程。BrdU 通过体外细胞培养或体内注射的方式进行探针加载,然后用抗 BrdU 的抗体进行特异性检测。
BrdU 标记后,对组织或细胞进行固定和透化后,需要额外的 DNA 水解步骤(有时也称 DNA 变性),从而允许抗 BrdU 的抗体能够与插入 DNA 的 BrdU 结合。BrdU 抗体能够与其他细胞标记物如 Ki67,双皮质素(DCX)和 NeuN 联合使用来鉴定增殖细胞和新分化神经元。
使用说明(仅供参考):
1. 体外标记细胞
1)制备 BrdU 储存液(10 mM):称取 3 mg BrdU(Mw:307.10)溶于 1 mL 去离子水,充分溶解即可。
2)用细胞培养基按照 1:1000 的比例将储存液稀释到 10 μM BrdU 染色液,并在无菌条件下用 0.2 μm 滤膜对染色液进行过滤除菌。
3)吸掉细胞内培养基并更换无菌的 10 μM BrdU 染色液,置于 CO2培养箱 37ºC 孵育 1-24 h。
【注意】:BrdU 孵育时间取决于细胞分裂速度。原代细胞可能要高达 24 h,但快速增值细胞系可能仅需 1h。达到最佳信噪比的时间需要通过优化条件来确定。
4)吸掉细胞内染色液,用 PBS 清洗 2 次,每次至少 5 s。
5)根据标准免疫细胞化学(ICC)操作流程进行细胞固定和透化。但是在开始免疫染色前需参照下述的DNA 水解步骤。
2. BrdU 体内标记(本产品未经动物注射实验检测)
【注意】:BrdU 体内标记方法比较多,常见的有腹腔注射法(Intraperitoneal injection)和口服法。以下为腹腔注射法的步骤,其他方法可参考文献或根据实验室固有经验操作。
1)用 1×PBS 溶解适量的 BrdU 配制成 10 mg/mL 储存液,过滤除菌,按照单次用量分装冻存后待用,避免反复冻融。
2)对于小鼠,通用情况注射浓度为 100 mg/kg。
3)BrdU 标记完成后,根据实验室已成的步骤处理动物。【注意】:BrdU 插入快速分化组织比如小肠,在注射后 30 min 就能检测到。但大多数组织可能需要高达 24 h 才能检测到。合适的处理时间和注射剂量需要根据组织类型来优化。
3. DNA 水解(DNA 变性步骤)
3.1 细胞样本
1)用 1-2.5 M HCl 室温孵育细胞 10 min-1 h,实际的 HCl 浓度和孵育时间根据实验来优化。如果使用更短的孵育时间,37°C 孵育可能比室温孵育效果更好
2)可选步骤:去除 HCl,用 0.1 M 硼酸钠缓冲液,pH 8.5 室温中和 30 min。【注意】:0.1 M 硼酸钠缓冲液(pH 8.5)配置方法:称取 3.8 g 硼酸钠(Mw=381.4)加入 100 mL 蒸馏水,充分溶解后,用 NaOH 调整到所需 pH。
3)用 PBS 清洗 3 次,每次不少于 5 s。
4)根据标准 ICC 操作流程继续后续染色。
3.2 组织切片
【注意】:对于石蜡切片必须先做脱蜡处理再进行 DNA 水解步骤。
1)用 1-2 M HCl 室温孵育切片 30 min-1 h,实际的 HCl 浓度和孵育时间根据实验来优化。如果使用更短的孵育时间,37°C 孵育可能比室温孵育效果更好。
2)可选步骤:去除 HCl,用 0.1 M 硼酸钠缓冲液(pH 8.5)室温中和切片 10 min。【注意】:0.1 M 硼酸钠缓冲液,pH 8.5 配置方法:称取 3.8 g 硼酸钠(Mw=381.4)加入 100 mL 蒸馏水,充分溶解后,用 NaOH调整到所需 pH。
3)用 PBS 清洗 3 次,每次不少于 5 s。
4)根据标准 IHC 操作流程继续免疫染色步骤。
注意事项:
1)BrdU 是一种诱变剂,操作过程一定要注意防护,不要与皮肤直接接触。另戴口罩避免粉尘吸入。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!