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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
50
- 英文名:
Xenopus laevis Modified Barth Solution(with calcium)
- 供应商:
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
500mL
储存条件:2-8℃
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文献和实验1.主要试剂:(1)固定液:10%甲醛甲醇溶液。(2)基质液:200 g/L β-甘油磷酸钠溶液。(3)缓冲液(pH 9.6):1.0 mol/L AMP溶液,内含钙离子0.03 mol/L和镁离子0.005 mol/L(用2 mol/L盐酸调 pH)。(4)基质缓冲液(pH 9.6):取上述基质液0.5 ml加入9.5 ml缓冲液中即可(临用时配制)。 2.方法:(1)新鲜血片或骨髓片,干燥后用固定液固定10 s,流水冲洗晾干。(2)取已37℃预温
加入 400 µL Dulbecco的改良Eagles 培养基 (DMEM + 10% 胎牛血清), 震荡均匀,吲哚菁绿溶液终浓度为2mg/ml; 4. 加入转染试剂鱼精蛋白,鱼精蛋白作为对照品的载体,使之能够有效进入细胞; 5. 在300 µL ICG 和 300 µL 无血清Dulbecco改良 Eagles 培养基中混入 5 µL 硫酸鱼精蛋白溶液, 使之终浓度为 10mg/ml,; 6. 震荡5分钟使之形成复合物,标记溶液制备完毕; 7. 从 hESC 10mm Petri 培养
l Taq多聚酶(lu/μl,Gene Amp Cetuo)。把上述溶液加入左侧二孔中,留一孔加入无引物的PCR混合液作为对照。将载片以22×66mm盖片覆盖,片周以无色指甲油封闭,放入自动的热循环仪(M.J.Re-seasCH,Boston MA)。可改良用铝锡箔纸覆盖于热循环仪表面再放置载片。按94℃/45℃/72℃每个温度1min,30个循环。这温度也可根据引物的GC比例加以调整以求得理想的扩增。也可根据下列公式计算引物的Tm值(Muller & Wold,1989)。 引物Tm
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