非变性酵母蛋白提取试剂盒
储存条件:RT,未开封有效期 24 个月。
产品内容:
产品说明:
本产品通过使用玻璃珠震荡法破壁结合化学法破碎酵母细胞壁,适用于多种酵母菌的培养物(包括菌
液或平板菌落)。提取液不含蛋白变性剂,提取过程无需高温处理,提取的总蛋白可用于蛋白活性检测相
关实验。该试剂盒提取的蛋白可以用 Bradford 定量试剂盒(SK1060)或 BCA 定量试剂盒(SK1070)进行
蛋白定量。
准备步骤:
将洗涤液和提取液置于冰上预冷。
操作步骤(小提):
1. 5,000 rmp,4 ℃离心 5 min,收集酵母菌液(1-5mL)细胞沉淀(酵母菌液 OD 值 0.5-2.0)。
2. 加入 1 mL 预冷的洗涤液,震荡混匀。5,000 rmp,4 ℃离心 5 min 沉淀酵母细胞,弃上清。
3. 用 100 μL 预冷提取液悬浮酵母细胞,并快速转移到 1.5 mL 塑料离心管中。
4. 加入 0.5 g 的玻璃珠,在旋涡震荡器上剧烈震荡混合 5-10 min(间歇冰浴冷却)。
5. 用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。
6. 再加入 100 μL 预冷提取液到剩余的玻璃珠中,稍加震荡,再次回收提取液。
7. 合并两次所得提取液即为酵母总蛋白样品。
8. (可选步骤)12,000 rmp,4 ℃离心 15 min,上清含可溶性蛋白质,沉淀含不溶性蛋白质。
9. 提取总蛋白样品直接用于后续活性检测实验或-80 ℃保存备用。
操作步骤(大提):
1. 5,000 rmp,4 ℃离心 5 min,收集酵母菌液(100-500mL)细胞沉淀(酵母菌液 OD 值 0.5-2.0)。
2. 加入 50 mL 预冷的洗涤液,震荡混匀。5,000 rmp,4 ℃离心 5 min 沉淀酵母细胞,弃上清。重复洗涤一次。
3. 用 10 mL 预冷提取液悬浮酵母细胞,并快速转移到 50 mL 塑料离心管中。
4. 加入 5 g 的玻璃珠,在旋涡震荡器上剧烈震荡混合 5-10 min(期间可以将样品置于-80 冰箱速冻 5min 后继续震荡,可以提高裂解效率)。
5. 用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。
6. 再加入 10 mL 预冷提取液到剩余的玻璃珠中,稍加震荡,再次回收提取液。
7. 合并两次所得提取液即为酵母总蛋白样品。
8.(可选步骤)12,000 rmp,4 ℃离心 15 min,上清含可溶性蛋白质,沉淀含不溶性蛋白质。
9. 提取总蛋白样品直接用于后续活性检测实验或-80 ℃保存备用。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!