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HEPES解离液
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50
HEPES Isolation Buffer
2年
上海博尔森生物科技有限公司
-20℃
100mL
储存条件: -20℃保存,保质期 2 年。
产品内容:
产品介绍:
植物的核 DNA 含量和倍性水平是植物学研究中重要的基础研究指标。流式细胞术的应用,提高了植物核 DNA 含量检测的准确度和检测速度。
只通过物理方法即切碎叶片往往不能获取大量完整的细胞核,还需加入特定的解离液,使植物细胞破碎,分散细胞器,进而解离出细胞核。同时解离液还可以防止细胞间相互粘连,抵消次生代谢物带来的消极影响,并维持一定的渗透压,保证细胞核的完整性。
产品说明:(使用举例)
Otto 两步法:
1. 分别取内标植物和黄芩叶片约 1cm2 放到培养皿中,加入 4℃保存备用的 OttoⅠ提取液 1mL,用锋利的单刃刀片垂直快速切碎叶片;
2. 混匀后用枪头吸取提取液经 30um 的滤头过滤到 1.5mL 的离心管中,4℃、1000g 离心 5min,小心吸弃上清;
3. 加入 500uL Otto II 溶液(临用前加入 0.02mg/mL RNase A+0.02mg/mL PI)备用。
LB01 一步法(其他解离液参照此解离步骤):
1. 同两步法取材后,加入分装解冻后的 LB01 提取液 1mL,快速切碎和过滤得细胞核悬液;
2.在上机测试前约 5min,每管加入 20uL 的 RNase 储存液(1mg/mL)和 20uL 的 PI 储存液(1mg/mL)。
注意:上述操作中,刀片要锋利,材料要浸入提取液,垂直快速切碎,解冻的 PI 和加入 PI 的细胞核悬液,均需要冰上低温避光保存,每个样品需要 3 个重复。
荧光染料选择:
Hoechst 33342,Hoechst 33258 和 DAPI 属于非嵌入式染料,主要结合在 DNA 的 A-T 碱基区,因此此类染料不适合于检测基因组绝对值,实际测量值偏小。但是可以获得高分辨率的柱状图,可以用于倍性水平检测。
PI,EB,AO 为嵌入式染料,在检测核 DNA 的含量前,需要先降解 RNA,排除双链 RNA的干扰,此类染料只能染死细胞,也可以用来区分活死细胞。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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