病毒RNA提取试剂盒
保存条件:4℃保存,保质期 1 年。
产品内容
产品说明:
病毒 RNA 提取试剂盒 II 型是 I 型(沉淀法)基础上利用吸附柱纯化 RNA 样品的试剂盒。适用于血清(血浆)等液体样品中微量病毒 RNA 的提取。
适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。
提取的 RNA 可用于 RT-PCR 和 qRT-PCR。
操作步骤:(样品裂解,样品纯化,RNA 收集)
一:样品裂解
1. 在 1.5 mL 离心管中加入 0.1-0.2 mL 液体病毒样品。如果病毒需要富集,可以将 1.5 mL 液体在 4℃下 24,000 g 冷冻离心 60 分钟,移弃 1.3 mL 后继续操作。
2. 加入 0.6 mL 裂解液 VR,振荡 30 s 混匀后室温放置 10 分钟。
注意:裂解液 VR 在 4℃放置后可能会产生沉淀,使用前请置于 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
二:样品纯化
1. 将溶液全部转移到 RNA 纯化柱中,室温放置 2 分钟。
2. . 13000 g 室温离心 1 分钟,弃收集管中穿透液。
3. 在纯化柱中加入 0.5mL RNA 洗涤液,室温 12,000rpm 离心半分钟,弃穿透液。
三:RNA 收集
1. 将结合有 RNA 的纯化柱 12,000rpm 离心 1min,甩干乙醇。(乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验,或者适当延长离心时间,将有助于乙醇的去除)
2. 弃收集管,将柱芯转移到 1.5mL 的 RNase-free 离心管中,加入 30-50uL DNase&RNase-free 水,室温放置 1 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟洗脱 RNA。得到的RNA 可直接用于后续实验或者 -80℃ 存放。
3. 如果要提高 RNA 产量,加入 30-50uL DNase&RNase-free 水重复洗脱一次,合并两次穿透液;如果要提高 RNA 浓度,使用第一次的洗脱液加回到纯化柱中重复洗脱。
四:疑难问题病毒颗粒中的 RNA 或 DNA 是作为遗传物质保存,每个病 毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种 RNA 分子,每种 RNA 有很 多拷贝),同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一),样品 中病毒数往往又不是很多,使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞 中核酸的绝对量还少,所以操作中十分容易丢失。另外,由于得到的核酸 绝对量很少,不能使用电泳和测OD 检测,只能通过 PCR 或 RT-PCR 检 测,而 PCR 或 RT-PCR 的条件又需要优化,所以要确定提取是否成功十 分不容易。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!