- ￥1950
- Sino Biological
- 北京
- HG30060-ACG
- 2025年08月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃ to -80℃
- 保质期：
12个月
- 英文名：
Human CERS1 transcript variant 1 Gene ORF cDNA clone expression plasmid, C-GFPSpark tag
- 库存：
99
- 供应商：
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格：
1 Unit
基因靶点：CERS1
反应种属：Human
应用说明：Stable or Transient mammalian expression
GeneBank ID：NM_021267.5
序列长度：1782
载体：pCMV3-C-GFPSpark
cDNA描述：Full length Clone DNA of Human ceramide synthase 1
标签序列：GFPSpark: GTGAGCAAGGGC……GAGCTGTACAAG
酶切位点：KpnI(two restriction sites) + XbaI(6kb+0.60kb+1.20kb)
质粒：pCMV3-CERS1-t1-GFPSpark
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文献和实验( 1 ) PRSETB 细菌表达质粒（Invitrogen ) : 用于 Ni-次氮基三乙酸（NTA ) 琼脂糖蛋白纯化的 His-tag；用于选择的氨苄青霉素和用于诱导蛋白质表达的异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷（IPTG )。 ( 2 ) pcDNA3 哺乳动物瞬时表达质粒（Invitrogen ) : 巨细胞病毒启动子和用于细菌选择的氨苄青霉素抗性基因。 2.2 生物化学和生物物理鉴定 ( 1 ) Luria-Bertani ( LB ) 培养基：10 g 胰蛋白胨，5 g 酵母
Invitrogen的王牌：Lipofectamine 2000转染试剂
稳定表达，转入的基因必须能和细胞同步复制。在转染的质粒自发整合到宿主基因组上时就会如此。在一小部分转染的细胞中，加入的DNA通过重组整合到基因组上。包含整合DNA的细胞很少，必须通过对药物的抗性筛选进行扩增或通过表型变化进行鉴定。稳定基因表达实验需要数周，如果需要验证蛋白产量，所需的时间更长。但得到的细胞系可以做为蛋白生产的稳定来源或用于得到转基因动物。 瞬时转染和转染效率的监测：基因的瞬时表达在24-72小时内就结束了。这种快速的瞬时表达非常适用于验证质粒表达和监测转染步骤的效率
双链短RNA（dsRNA)阻断基因表达机理及双链RNA的构建
RNA非特异的阻断哺乳动物成体细胞中的基因表达，RNAi在哺乳动物成体细胞中的应用受到限制。但Tuschl等人的研究工作克服了这一障碍。他们发现，21个核苷酸的双链RNA能够诱发哺乳动物细胞内的RNAi机制，同时不会激活细胞内的干扰素 [7]。他们合成了以荧光素酶的mRNA为靶分子的21个核苷酸的双链RNA，将它和荧光素酶的表达质粒用脂质体共转染到NIH3T3,COS- 7,Hela S3,293细胞中，报告基因的表达被抑制了90%。由于报告基因得到的结果不能完全说明细胞内的情况，他们又合成了细胞
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