- ￥338 - 1178
- 博尔森/BIOESN
- BES20083KB
- 中国
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50
- 英文名：
Quick Yeast positive clone assay Kit
- 保质期：
24个月
- 供应商：
上海博尔森生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
20T /50T /200T
| 规格： | 20T | 产品价格： | ￥338.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50T | 产品价格： | ￥458.0 |
| 规格： | 200T | 产品价格： | ￥1178.0 |
酵母阳性克隆快速检测试剂盒（筛库）
保存条件：-20 ℃储存，未开封有效期 24 个月。
包装内容：
产品说明：
本产品用于酵母单杂双杂筛库系统，可以快速地扩增、分选并分析文库筛选所获得的阳性克隆中 prey/文库质粒的 cDNA 插入片段。
PCR Mix 含 Taq、dNTP、PCR buffer 和水，只需要补充模板 5 μL，引物混合物 1 μL 即可用于 PCR 扩增。可供 50 μL PCR 体系进行 200 次扩增实验。3AD& 5AD 引物混合物可用于 pGADT7、pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2 系列载体构建的 AD 文库。每 50 μL 体系加入 1 μL 引物混合物。亦可根据需要加入自备引物。本试剂盒除提供菌落裂解液 I 用于平板菌落 PCR 外（可供 200 T），还免费提供菌液裂解液 II 用于菌液 PCR（可供 20 T）。
使用方法：
菌落样品
1. 准备 PCR 预混液：根据检测克隆数，等比例扩大配制体积。
2. 吸取 5 μL 菌落裂解液 I 加入 PCR 管中（如处理样品量大，建议用 8 联排 PCR管）。
3. 用无菌牙签或者枪头刮取适量直径 1-2 mm 的酵母菌落悬浮在菌落裂解液 I中。
4. 吹打或者震荡混匀后，静置 5 min，即为裂解产物。
5. （可选步骤）于-20 ℃冷冻 5 min 或置于-80 ℃冰箱速冻 10 s。
6. 在裂解产物中加入 45 μL PCR 预混液（已加引物），直接 PCR 扩增。
注意：
1. 先取 3-5 个克隆进行预实验后再进行批量实验。
2. 培养时间短的样品，无需冷冻。冷冻完的样品可直接加入 PCR 预混液，解冻与否均可。
3. 团状酵母菌落很难裂解，吹打或者震荡混匀尤为重要。
4. 如预实验失败，将上述第 4 步得到的裂解产物置于 PCR 仪 98 ℃保温 5 min后，用掌上离心机（8 联排），离心 1min 后取上清加入 45 μL PCR 预混液中，可有效提高 PCR 效率。
菌液样品
1. 吸取 5-10 μL 菌液裂解液 II 加入 PCR 管中（如处理样品量大，建议用 8 联排PCR 管）。
2. 再加入等体积的酵母菌液，震荡混匀。
3. 于-20 ℃冷冻 3 min 或置于-80 ℃冰箱速冻 10 s 后，PCR 仪 95 ℃保温 2 min。
4. 12,000 rmp 离心 2 min，取裂解产物（上清），用于 PCR 扩增。
PCR 反应体系:
PCR 反应条件：
注意事项：
1. 菌落 PCR 前，先刮取部分菌落保存，可以有效避免样品污染和丢失。
2. 新鲜菌落的 PCR 成功率接近 100%。如生长期较长的菌落，请先进行预实验。
3. 如部分样品经过多次 PCR 都无法检测成功。建议小摇之后，用快速酵母质粒提取试剂盒）提取（约需 30 min），再进行 PCR 扩增。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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文献和实验第二章 酵母双杂交筛选 1. 操作流程 诱饵基因转化筛库宿主菌Y190――>含诱饵基因的Y190 保种――>诱饵基因的 自激活检测――>筛库(组织库或者小文库)――>挑选鉴定阳性克隆――>抽提阳 性克隆中PREY 质粒并在细菌中扩增――>猎物(Prey)质粒与诱饵(Bait)质粒共 同转化Y190，验证其相互作用 2. 方 法 2. 1 诱饵基因转化筛库宿主菌Y190 1） 3 个1mm 克隆接种于3mlYPD 液体培养基30℃振荡培养20 小时(过夜
基酸（AD），分别构建重组质粒。如果在BD上接上一个蛋白X，在AD上接一个蛋白Y，再将这二个质粒共同导入酵母菌中，若X，Y蛋白在酵母内发生交互作用，则相当于将GAL4的BD和AD又连在一起，即可以转录激活下游报告基因的表达，通过测定报告基因的产物及活性来检测这种交互作用的发生（图4）。理论上，任何能在酵母中表达的基因均可作为报告基因，较为常用的是LacZ，和一些营养缺陷标记，这种报告基因只允许阳性克隆生长，最常用的是HIS3和LEU2。近来为了更灵敏、特异地筛选阳性克隆,常同时使用两种或两种以上的报告
性，说明Leu虽有表达，但 5-3. 同时用LacZ、Leu两个报告基因的目的，是为了尽可能消除实验的假阳性误差，譬如：AD融合蛋白不与目标蛋白结合，而直接与启动子序列结合域结合等情况。由于2个报告基因的启动子不同，出现上述假阳性的几率就大大减少了。 5-4. 将蓝色阳性克隆进行1次以上的划种，尽可能分离克隆中的多种文库质粒。 6. 阳性克隆的筛选 6-1. 随机选取50个阳性克隆，扩增、抽提酵母质粒，电转化E.coli KC8宿主菌，抽提大肠杆菌中的
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