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SD 3.0 DNA/RNA
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50
SD 3.0 DNA/RNA Polymerase
3年
上海博尔森生物科技有限公司
-20°C
200T(25 µl体系)
SD 3.0 DNA/RNA 聚合酶(SD 3.0 DNA/RNA Polymerase)
描述:SD 3.0 DNA Polymerase 为具有链置换活性的耐高 温 DNA 聚合酶,该酶中包含 ThermoStable V 耐热反转录 酶。该酶专用于一步法巢式 TaqMan RT-PCR(TaqMan One-Step Nested RT-PCR),在搭配 HaiGene 的 P-Bond 荧 光探针的情况下可实现高灵敏度的巢式定量 PCR。该酶 为热启动版本,仅有在 90℃加热 5min 后才能恢复 DNA 聚合酶的扩增活性。关于 TaqMan One-Step Nested PCR 技 术细节,请登录 HaiGene 网站进行浏览。
注意:在槽式 PCR 的扩增中,再增加一对外侧引物(6 引物系统), 将会使 PCR 扩增速度和灵敏度更高,此时引物的特异性将会变得 苛刻,否则会造成非特异性扩增。常见问题 问题 1: TaqMan One-Step Nested PCR 是否可以做定量分析? 回答:由于采用槽式扩增系统,每个循环的倍增在 2-4 之间(在 6 引物系统中会更高),而不是传统 PCR 的 2 倍关系,因此不建议进 行定量检测。但 Nested PCR 在不同的梯度模板中仍然表现出很好 的浓度梯度关系,仍然可以通过 Ct 值判读模板的含量区间。问题 2: 常规 TaqMan 探针能否代替 Nested P-Bond 探针? 回答:常规 TaqMan 探针对模板的绑定能力较 P-Bond 探针差很多, 多数情况下切割效率低下,甚至不工作,因此不建议采用常规 TaqMan 探针。问题 3: 每一条 Nested P-Bond 探针都能 100%工作吗? 回答:由于未知的原因,目前还不能保证每条 Nested P-Bond 探针 100%工作,有个别的探针切割效率低下、甚至无信号。总体来言, 目前Nested P-Bond探针的成功率>80%,成功率还在不断的改善中。问题 4: 怎样的设计才能达到单 copy 的检测水平? 回答:在采用 6 引物扩增系统中总能获得最高的检测灵敏度,但引 物组合的筛选工作具有一定的挑战性。问题 5: TaqMan One-Step Nested PCR 如何进行内参质控设计? 回答:在对内源内参进行扩增时,考虑到内源内参不需要很高的灵 敏度,我们建议采用常规 2 条引物系统即可,通常内参扩增引物的 使用浓度在 50-100nM 的浓度即可。问题 6: TaqMan One-Step Nested PCR 如何进行多靶基因设计? 回答:如果多靶基因设计的目标为,防止靶基因突变造成的脱靶(假 阴性),那么通过在内侧引物区域内采用 2 条探针检测即可解决脱 靶问题。如果多种病原单管检测设计目标的话,由于使用的引物条 数大幅增加,可参考 MultiPlex 设计方案对引物系统进行优化组合, 这是具有一定挑战性的。问题 7:TaqMan One-Step Nested PCR 可以进行直扩反应吗? 回答:SD 2.0 DNA Polymerase 对杂质具有相当的耐受性,在 DNA 模板的检测中,可以采用粗制样品进行扩增。稍后我们会给出详细 的参数。由于 SD 3.0 DNA/RNA Polymerase 在反转录反应前,不能 加热裂解样本,所以对 RNA 的模板检测来言,TaqMan One-Step Nested RT-PCR 还不能进行粗样品的直接检测。RNA 粗制样本的直 接检测请使用我处 mTTx DNA/RNA 聚合酶系统。特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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