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Klenow Fragment
企业认证
150U
目录号:M004-01A
产品描述:
本制品是利用基因工程技术表达大肠杆菌DNA聚合酶I大片段,并经过多次纯化分离而得到的。该酶只具有5´→3´的DNA聚合酶活性和3´→5´的外切核酸酶活性,不具有DNA聚合酶I的5´→3´外切核酸酶活性。其常用于双链DNA末端修饰、Sanger法测序、cDNA第二条链的合成。
产品用途:
1)双链DNA 5´突出末端的补平;
2)双链DNA 3´突出末端的削平;
3)双链DNA 3´-末端的标记;
4)双脱氧法DNA序列测定(Sanger法);
5)使用随机引物进行DNA标记;
6)cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。
应用实例:
双链DNA 5´突出末端的补平,操作步骤如下:
1)试剂融化后,在冰上配制如下反应体系:
2)将反应液轻轻混匀,并瞬时离心。
3)37℃孵育10分钟。
4)75℃孵育20分钟,终止反应。
保存温度:
-20℃
产品包装(A包装):
产品组成 体积
Klenow Fragment(5U/μl) 30μl
10×Klenow Reaction Buffer 1ml
质量保证:
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带,PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
活性定义:
在37℃条件下,30分钟内能使10 nmol的dNTPs渗入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
热失活:
75℃,20分钟。
注意事项:
1)使用时将酶置于冰上操作,使用完毕后-20℃保存。
2)操作时动作要轻柔,剧烈搅拌会使酶失去活性。
3)由于不具有5´→3´外切核酸酶活性,因此不具有切口平移活性。
4)由于同DNA有较强的亲和性,过量使用酶,会由于凝集作用而抑制反应进行
5)金属离子螯合剂,无机焦磷酸盐,大剂量的无机磷酸盐对酶有抑制作用。
For research only
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