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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
QuantiFast Multiplex RT-PCR+R Kit (2000)
- 供应商:
QIAGEN/凯杰
- 规格:
详见说明书
特点
- 灵敏检测单管中的多个目标
- 快速获得结果,可节省多达50%的时间
- 无需优化,即可成功进行多重PCR
- 准确区分起始量相近的模板
产品详情
应用QuantiFast Multiplex PCR Kit可在单管内通过多重两步法real-time PCR对多至4个cDNA进行快速、可靠的定量检测。Q-Bond和优化的预混液促进快速多重real-time PCR的进行,适用于快速或标准PCR仪。即用型预混液中的热启动酶和独特的PCR缓冲液可确保在所有real-time PCR仪上进行灵敏的qPCR,无需优化。有两种规格的试剂盒:QuantiFast Multiplex PCR Kit适用于需要ROX染料进行荧光信号校准的PCR仪,QuantiFast Multiplex PCR +R Kit适用于其他所有PCR仪。为便于使用,预混液可保存在2–8°C。
绩效
随QuantiFast Multiplex PCR Kit提供的特制的预混液可快速构建多重反应,得到的多重PCR反应结果可与单重PCR反应结果相媲美(参见" Comparable results in triplex and singleplex PCR")。该试剂盒可清楚区分模板量的细微差别。即使模板量仅有两倍的差别,该试剂盒也能精确定量丰度差别较大的2个靶基因(参见" Linear CT values over twofold decreases in template")。
QuantiFast Multiplex PCR Kits可节省多达50%的PCR反应时间,让您更快获得结果(参见" Significantly reduced PCR times")。只需60分钟,即可检测到低至10个拷贝的靶基因(参见" Sensitive duplex PCR and a wide dynamic range")。您可极大地提高样本通量或与其它使用者有效地共享PCR仪。该试剂盒可对多达4个靶基因进行快速、多重real-time PCR,且不会影响PCR效果(参见" Uncompromised sensitivity")。
原理
QuantiFast Multiplex PCR Kits可在标准或快速PCR仪上快速、灵敏的获得反应结果,无需优化(参见" QIAGEN multiplex kits")。特制的快速PCR缓冲液含有新型Q-Bond成分,可明显缩短变性、退火和延伸的时间(参见" Fast primer annealing")。
在同一个反应中同时扩增对照和靶基因,而非分开反应,减少了操作误差,提高了检测的可靠性。QuantiFast Multiplex PCR Buffer 含有平衡配比的K+和NH4+以及独特的MP因子,二者可促进引物、探针与核酸模板的稳定高效结合,确保高效的PCR反应(参见" Unique PCR buffer")此外,HotStarTaq Plus DNA Polymerase要求严谨的热启动,可阻止非特异性产物的形成。
| 成分 | 特点 | 优势 |
|---|---|---|
| HotStarTaq Plus DNA Polymerase | 95ºC加热5分钟活化 | 在室温进行qPCR反应体系构建 |
| QuantiFast Multiplex PCR Buffer | 平衡的NH4+和K+离子配比 | 引物探针的特异性结合确保获得可靠结果 |
| 合成的MP因子 | 在单管中可靠的对至多4个基因进行多重分析 | |
| 独特的Q-Bond添加剂 | PCR运行时间缩短,更快获得结果,一天内可完成更多PCR反应 | |
| ROX染料† | 对Applied Biosystems和Agilent PCR仪进行荧光信号的校准 | 对需要ROX染料的PCR仪进行校准,不影响PCR反应结果 |
程序
QuantiFast Multiplex PCR Kit含有即用型预混液,无需优化反应及循环条件。只需将cDNA和引物探针对加入预混液中,按照操作手册进行实验,即可快速获得可靠的结果,适用于所有real-time PCR仪。试剂盒提供两种形式:预混液中含有或不含荧光校正用的ROX染料,可用于所有PCR仪(参见下表)。由于ROX浓度经优化,即使是低拷贝数也可通过数据自动分析进行检测。
| ROX染料 | 试剂盒 | 适用的PCR仪 |
|---|---|---|
| 混合在预混液中 | QuantiFast Multiplex PCR Kit | 除Applied Biosystems 7500外的所有Applied Biosystems仪器 |
| 单独装在管中 | QuantiFast Multiplex PCR +R Kit | Applied Biosystems 7500、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、QIAGEN、Roche、Agilent和其他供应商的PCR仪 |
为获得最佳的两步法real-time RT-PCR结果,我们建议使用QuantiTect Reverse Transcription Kit合成cDNA。该试剂盒可在20分钟进行快速cDNA合成,并去除基因组DNA污染。
QuantiFast Probe Assays利用序列特异性水解探针检测技术,是适合全基因组的预制试剂。 随QuantiFast Multiplex PCR Kit提供,可确保在双染两步法real-time RT-PCR反应中获得可靠结果。
应用
QuantiFast Multiplex PCR Kit可用在各种real-time PCR仪上对cDNA进行多重基因表达分析,适用仪器包括Agilent、Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf和Roche的PCR仪。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪或其他Rotor-Gene PCR仪上使用时,我们推荐使用专为快速PCR研发的Rotor-Gene Multiplex PCR Kit。
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文献和实验the AllPrep DNA/RNA 96 Kit. Six targets (195-1150 bp) were amplified by multiplex PCR and then analyzed on the QIAxcel system. Li: liver; Ki: kidney; Lu: lung; In: intestine; Sp: spleen; NTC: no template control (shows upper and lower markers). Total
Ligase-mediated(overnight)T4 DNA ligase Original TA Cloning® Kit •≥80% recombinants K2000-10 K2030-10 •Blue/white color screening
Multiplex Illumina Sequencing Using DNA Barcoding
., Auerbach, R.K., Rozowsky, J., Gibson, T., Yellman, C.M., Gerstein, M., and Snyder, M. 2009. Efficient yeast ChIP‐Seq using multiplex short‐read DNA sequencing. BMC Genomics 10:37.
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