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Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (384 Index)
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有效期1年
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
-20度
384×1 T
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格/元 |
促销价/元 |
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (12 Index) |
12404ES01 |
12×2 T |
515.00 |
489.00 |
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (96 Index) |
12405ES01 |
96×2 T |
4135.00 |
3928.00 |
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (192 Index) |
12406ES01 |
192×1 T |
8160.00 |
7743.84 |
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (384 Index) |
12407ES01 |
384×1 T |
16320.00 |
15487.68 |
产品描述
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®是Illumina高通量测序平台文库构建专用接头试剂盒,包含二代测序建库中使用的PE adapter以及12/96/192/384种UDI Primer。该试剂盒提供的UDI Primer为I5、I7 Primer预混液,配合DNA Library Prep Kit for Illumina®使用,可构建多达384种双端唯一Index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证,最-大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
产品组分
编号 |
名称 |
规格 |
12404ES01 |
PE Adapter |
84 μL |
UDI Primer 0001-0012 |
10 μL each |
|
12405ES01 |
PE Adapter |
2×336 μL |
UDI Primer 0001-0096 |
10 μL each |
|
12406ES01 |
PE Adapter |
2×336 μL |
UDI Primer 0001-0192 |
5 μL each |
|
12407ES01 |
PE Adapter |
4×336 μL |
UDI Primer 0001-0384 |
5 μL each |
运输与保存方法
冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期1年。
注意事项
1)本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。
2)本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDI Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。
3)本试剂盒有四种规格,分别提供12/96/192/384种UDI Primer,可以构建多达384种双端唯一Index标记文库。
4)切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度最好设置为20-25°C。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4°C。
5)使用Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下:
6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
7)本产品仅作科研用途!
使用方法
本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina® 试剂盒操作说明进行。
接头连接 (Adapter Ligation)
在末端修复产物两端连接特定的Illumina®接头,即Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步骤3.2。
1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量;
表1 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度
Input DNA |
Adapter : Input DNA摩尔比 |
推荐Adapter(15 μM)使用量 |
400 ng |
30:1 |
3.5 μL |
300 ng |
40:1 |
3.5 μL |
200 ng |
60:1 |
3.5 μL |
100 ng |
100:1 |
3.0 μL |
50 ng |
100:1 |
1.5 μL |
【注】:Input DNA 摩尔数 (pmol)≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度 (bp)]
2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用;
3. 配制表2所示反应体系;
表2 Adapter Ligation反应体系
名称 |
体积 (μL) |
dA-tailed DNA |
60 |
Ligation Enhancer |
30* |
Quick T4 DNA Ligase |
5 |
PE Adapter |
x** |
ddH2O |
5-x |
【注】:*Ligation Enhancer比较粘稠,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。
**本公司接头浓度 (Cat#12404;Cat#12405;Cat#12406;Cat#12407)与常规商业化试剂盒一致,皆为15 μmol/L。
4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底;
5. 将PCR管置于PCR仪中,设置表3所示反应程序,进行接头连接反应:
表3 Adapter Ligation反应程序
温度 |
时间 |
热盖 |
Off |
20°C |
15 min |
4°C |
Hold |
【注】:当Input DNA量较低,实验效果不理想时,可尝试将连接时间延长一倍。
连接产物磁珠纯化 (Post Ligation Clean Up)
该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物,分选可筛选特定长度DNA片段以符合测序需要,详细操作步骤参照Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®建库试剂盒说明书。
文库扩增 (Library Amplification)
该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集,使用本试剂盒接头时,该步骤为必做步骤;
1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用;
2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系;
表4 PCR扩增反应体系
名称 |
体积 (μL) |
2× Super Canace® II High-Fidelity Mix |
25 |
UDI Primer |
5 |
Adapter Ligated DNA |
20 |
【注】:文库扩增引物来自Yeasen接头引物试剂盒 (Cat#12404;Cat#12405;Cat#12406;Cat#12407)。
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底;
4. 将PCR管置于PCR仪中,设置表5所示反应程序,进行PCR扩增:
表5 PCR扩增反应程序
温度 |
时间 |
循环数 |
98°C |
1 min |
1 |
98°C |
|
根据实验需要调整 |
60°C |
30 sec |
|
72°C |
30 sec |
|
72°C |
5 min |
1 |
4°C |
Hold |
- |
HB210809
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