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文献和实验4、如果细胞贴壁不好,可能是消化过久,或是培养瓶不够干净,当然要除外细胞污染。 5、如果使用用玻璃培养瓶或皿,可以采用高压灭菌的0.2%明胶溶液预处理培养瓶/培养皿,方法是将明胶加入培养皿,使之浸泡到底面的各个部分,然后吸出,置超净台内晾干即可使用。这样处理后细胞贴壁效果好且镜下细胞立体感强。如果是新的塑料培养瓶就不用处理。 培养基;GIBCO DMEM粉剂,加双抗,HEPES,NaHCO3 配置高糖的DMEM培养基1000ml, 1.一袋DMEM培养
CO2,100%湿度条件下培养。 培养基:ES:配制一20×不含DMEM,HS,ESGRO的溶液(该溶液也能用于EB培养基--见下文)。分装在50ml FALCON管中,(稀释为2×,每管42ml),贮存在-20℃。通过将21ml该溶液,HS和ESGRO加入450mlDMEM中制备培养基,0.2μm滤膜过滤。贮存于4℃。 注:一瓶DMEM是500ml。 贮存液:DMEM(高糖)、马血清(HS)、L-谷氨酰胺(200mM)、MEM NEAA(10
细胞可以来源于STO细胞或原代胚胎成纤维细胞。培养基ES:配制一20×不含DMEM,HS,LIF的溶液(该溶液也能用于EB培养基--见下文)。分装在50ml 离心管中,(稀释为2×,每管42ml),贮存在-20℃。通过将21ml该溶液,HS和LIF加入450ml DMEM中制备培养基,0.22 μm滤膜过滤。贮存于4℃,时间不要超过2周。贮存液 DMEM(高糖) 马血清(HS) L-谷氨酰胺(200mM) MEM NEAA(10mM) HEPES
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