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人乳腺癌成纤维细胞永生化

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  • ¥2500
  • SAIOS(赛奥斯)
  • CL-456h
  • 中国,武汉
  • 2026年02月02日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
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    • 品系

      详见说明书

    • 细胞类型

      详见说明书

    • 肿瘤类型

      -

    • 供应商

      武汉赛奥斯生物

    • 库存

      99

    • 英文名

      -

    • 生长状态

      详见说明书

    • 年限

      -

    • 运输方式

      活细胞/冻存

    • 器官来源

      详见说明书

    • 是否是肿瘤细胞

      -

    • 细胞形态

      详见说明书

    • 免疫类型

      详见说明书

    • 物种来源

      详见说明书

    • 相关疾病

      -

    • 组织来源

      详见说明书

    • 规格

      5×10⁵cells

    一.细胞描述

    乳腺位于皮下浅筋膜的浅层与深层之间。浅筋膜伸向乳腺组织内形成条索状的小叶间隔,一端连于胸肌筋膜,另一端连于皮肤,将乳腺腺体固定在胸部的皮下组织之中。乳腺是哺乳动物少数可以重复经历生长、功能分化和退化过程的器官之一。纤维结缔组织伸入乳腺组织之间,形成许多间隔,这些纤维结缔组织对乳房起固定作用,而纤维结缔组织是由成纤维细胞构成的。起支持作用和固定乳房位置的纤维结缔组织称为乳房悬韧带或Coopers韧带。浅筋膜深层位于乳腺的深面,与胸大肌筋膜浅层之间有疏松组织相连,称乳房后间隙。它可使乳房既相对固定,又能在胸壁上有一定的移动性。(该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。)

    二.细胞特性

    (1)细胞来源于手术切除的乳腺癌组织。

    (2)细胞生长方式:成纤维样细胞,贴壁培养。

    (3)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

    (4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

    (5)用途:仅供科研使用。

    三.推荐培养基

    我们推荐使用SAIOS原代成纤维细胞培养体系(货号:PM-003)作为体外培养原代乳腺成纤维细胞的培养基。

     

     

    名称

    体积

    浓度

    保存条件

    原代成纤维细胞基础培养基

    500ml

    4℃、避光

    原代成纤维细胞培养添加剂

    5ml

    100×

    -20℃、避光

    胎牛血清(FBS)

    50ml

    终浓度10%

    -20℃、避光

    双抗(青霉素/链霉素,P/S)

    5ml

    100×

    -20℃、避光

     

     

    四.运输和保存

    (1)冻存细胞:1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

    (2)复苏好的活细胞:T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

     


    细胞接收后的处理:

    (1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

    (2)请在4或5x显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

    (3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

    (4)注意:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。

    细胞处理:

    (1)冻存细胞的复苏:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

    (2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

    对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

    1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

    2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化。

    3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

    (3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

    下面以T25瓶为例:

    (1)细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。

    (2)1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞,按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

    (3)将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80℃冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存,同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

     

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