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- YLKBIO
- YLK-XB2009
- 上海
- 2026年03月02日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
/
- 细胞类型：
细胞系
- 肿瘤类型：
/
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 库存：
100
- 英文名：
OKT 3
- 生长状态：
悬浮细胞
- 年限：
永久
- 运输方式：
快递形式
- 器官来源：
/
- 是否是肿瘤细胞：
/
- 细胞形态：
淋巴母细胞样
- 免疫类型：
/
- 物种来源：
人
- 相关疾病：
/
- 组织来源：
/
- 规格：
1×10⁶cells/T25培养瓶
细胞中文名称：OKT3小鼠杂交瘤细胞(抗CD3)（带STR鉴定）
| 名称 | OKT 3 (小鼠杂交瘤细胞(抗CD3)) |
| 别称 | OKT3 |
| 种属 | 小鼠(B细胞)，小鼠（骨髓瘤细胞） |
| 组织来源 | 脾脏 |
| 生长特性 | 悬浮细胞 |
| 细胞形态 | 淋巴母细胞样 |
| 背景描述 | OKT 3细胞是一株用人外周血淋巴细胞免疫小鼠，然后取免疫小鼠的脾细胞与P3X63Ag8.U1骨髓瘤细胞融合而建株的细胞系。 |
| 生长培养基 | IMDM＋20% FBS＋1% P/S |
| 推荐传代比例 | 3×10^5-5×10^5cells/mL |
| 推荐换液频率 | 2~3次/周 |
| 冻存条件 | 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮 |
| 培养条件 | 气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃ |
| 注意事项 | 该细胞为悬浮细胞，请注意离心收集细胞悬液；请勿直接倒掉细胞培养液。 |
| 保藏机构 | ATCC; CRL-8001 ECACC; 86022706 |
1、 细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养
液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，最后放入 37℃， 5%CO2 细胞
培养箱中培养；
2、 细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终
止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）用适量的冻存液（FBS： DMSO=9 ： 1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序
降温盒可直接放入-80℃。
3、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结
晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；
3）弃上清，沉淀用 6ml 完全培养基重悬，接种 25cm2 培养瓶，于 37℃， 5%CO2 细胞培养箱中培养
OKT3小鼠杂交瘤细胞(抗CD3)（带STR鉴定）收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，悬浮细胞需离心处理，加入6ml新鲜完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤说明书。
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文献和实验【摘要】目的 构建和表达抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体，并测定该微型双功能抗体的生物学活性。方法 采用PCR和overlap PCR方法构建抗CD3/抗CD20微型双功能抗体，并用双脱氧终止法测定DNA序列；采用亲和层析法纯化该产物，并用Western blot和分子排阻层析鉴定纯化产物；采用免疫荧光法、放射免疫分析法和玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果 DNA序列测定结果表明：抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体已构建成功，表达可溶性产物的产量达2mg/l以上，纯化产物中二
―杂交瘤技术、DNA重组技术等。 单抗的制备首先将抗原注射人小鼠体内，然后从小鼠脾脏中获得能够产生抗体的B细胞，与小鼠骨髓瘤细胞在灭活的仙台病毒或聚乙二醇的诱导下融合，再在特定的选择性培养基中筛选出杂交瘤细胞。由于杂交瘤细胞继承了双亲细胞的遗传物质，因此，它不仅具有B细胞分泌特异性抗体的能力，还有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的本领。由此可以获得足够数量的细胞。 单抗的制备过程 1，抗细胞表面分子的单抗 这类抗体能识别和结合表达特定膜表面分子的细胞
，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。 点此查看完整实验步骤 6. 单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。 （1）体内诱生法 取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5 ml液体石腊或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量
