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MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit
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有效期1年
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
-20度
25T
产品信息
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格(元) |
MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit 磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(瓶装) |
18461ES25 |
25 T |
425.00 |
18461ES60 |
100T |
1,395.00 |
产品描述
MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit适用于生物制品样本中残留DNA检测的前处理。采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系,可最大限度的分离纯化样本中的微量宿主细胞残留DNA。
该前处理试剂盒可与多种宿主细胞DNA残留(qPCR法)检测试剂盒配合使用,包括CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41301)、HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41302)、Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41303)和E.coli残留DNA检测试剂盒(Cat#41304)。
产品组分
类别 |
组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
|
18461ES25(25 T) |
18461ES60(100 T) |
|||
Part I |
18461-A |
蛋白酶K(20 mg/mL) |
0.5 mL/支×1支 |
1 mL/支×2支 |
Part Ⅱ |
18461-B |
磁珠悬浮液 |
0.5 mL/支×1支 |
1 mL/支×2支 |
18461-C |
裂解液 |
2.5 mL/瓶×1瓶 |
10 mL/瓶×1瓶 |
|
18461-D |
结合液 |
10 mL/瓶×1瓶 |
40 mL/瓶×1瓶 |
|
18461-E |
洗涤液A* |
6 mL/瓶×1瓶 (需加9 mL乙醇) |
24 mL/瓶×1瓶 (需加36 mL乙醇) |
|
18461-F |
洗涤液B* |
3 mL/瓶×1瓶 (需加12 mL乙醇) |
12 mL/瓶×1瓶 (需加48 mL乙醇) |
|
18461-G |
洗脱液 |
2.5 mL/瓶×1瓶 |
10 mL/瓶×1瓶 |
|
Part Ⅲ |
18461-H |
糖原 |
225 μL/支×1支 |
900 μL/支×1支 |
18461-I |
Poly A钾盐 |
150 μL/支×1支 |
600 μL/支×1支 |
运输和保存方法
Part I组分室温运输,4℃可保存1年,长期保存于-20℃。
Part II组分室温运输,室温保存,有效期1年。
Part Ⅲ 组分冰袋运输,-20℃保存1年。
注意事项
1. 注意观察常温保存溶液是否有析出或浑浊(尤其冬季等室温为低温环境时),可37℃水浴至溶液澄清,避免影响使用效果。
2. 洗脱时可能存在磁珠残留,吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。
3. 处理样本及加样时,勤换枪头,避免交叉污染。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5. 本产品仅作科研用途!
实验前准备
1. 自备设备和试剂:磁性分离架、杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪或其他全自动化提取仪,水浴锅或金属浴,离心机,漩涡振荡器,1.5 mL离心管,无水乙醇等。
2. 首次使用前,在洗涤液A*和洗涤液B*瓶中加入标签或说明书中注明体积的无水乙醇,充分混匀后使用,并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧,以保持瓶中的乙醇含量。
一、手工提取操作方法
1. 样本处理
a. 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本,可用1×PBS(pH=7.4)对样本进行适当比例稀释后提取(对样本进行稀释是为了保证检测的准确性,使样本的检测值在标准曲线线性范围之内,通常可考虑进行100倍稀释)。
b. 待测样本为干粉的,可用ddH2O将样本稀释成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。
c. 待测样本为复杂背景基质的,可根据需要进行加标回收实验,以确定合适的样本稀释倍数。
2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中,加入100 μL裂解液,10 μL蛋白酶K,涡旋混匀10 sec。
【注】:样本蛋白浓度0-100 mg/mL,蛋白酶K用量为10 μL,样本蛋白浓度100-200 mg/mL,蛋白酶K用量为20 μL。
3. 60℃孵育20 min。
4. 孵育完成后,加入400 μL结合液、9 μL糖原、6 μL Poly A钾盐涡旋混匀。
5. 加入20 μL磁珠,涡旋混匀后,放置10 min,每隔3 min涡旋混匀10 sec。
【注】:磁珠使用前需涡旋混匀,保证磁珠彻底重悬。在一次性加样4-5次后,建议再次混匀后再行加样。
6. 短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1-2 min,待磁珠完全吸附,小心吸出液体。
7. 加入500 μL洗涤液A(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡或涡旋混匀,确保磁珠分散,离心管壁无聚集磁珠。
8. 短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1-2 min,待磁珠完全吸附,小心吸取液体。
9. 加入500 μL洗涤液B(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡或涡旋混匀,确保磁珠分散,离心管壁无聚集磁珠。
10.短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1-2 min,待磁珠完全吸附,小心吸取液体。
11.为保证尽量吸出残留液体,可将离心管快速离心10 sec后,置于磁力架上用10 μL移液器吸出残留液体。
12.打开管盖,室温放置3 min直至乙醇完全挥发。观察到磁珠表面无反光或出现裂隙即表明乙醇已挥发完全。
13.将离心管从磁力架上取下,加入50-100 μL 65℃预热的洗脱液,振荡混匀,短暂离心后,65℃孵育5 min,期间可振荡混匀1次。
14.短暂离心后,将离心管放置于磁力架上静置2 min,待磁珠完全吸附,小心将DNA溶液转移至新的离心管中,保存于-20℃,长期保存需放置于-80℃。
二、半自动化提取操作方法
配套自动化仪器使用,以杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪为例(如要配套其他主流自动化仪器使用,程序可向翌圣生物科技(上海)股份有限公司获取):
1. 样本处理
a. 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本,可用1×PBS(pH=7.4)稀释100倍或1,000倍后提取。
b. 待测样本为干粉的,可用ddH2O将样本稀释成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。
c. 待测样本为复杂背景基质的,可根据需要进行加标回收实验,以确定合适的样本稀释倍数。
2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中,加入100 μL裂解液,10 μL蛋白酶K,涡旋混匀10 sec。
【注】:样本蛋白浓度0-100 mg/mL,蛋白酶K用量为10 μL,样本蛋白浓度100-200 mg/mL,蛋白酶K用量为20 μL。
3. 60℃孵育20 min,即为预处理样本,待用。
4. 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂(以杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪为例):
板的名称 |
位置 |
试剂名称 |
用量/孔 |
样品处理板 |
V1 |
预处理样本 |
200 µL |
结合液 |
400 µL |
||
糖原 |
9 µL |
||
Poly A钾盐 |
6 µL |
||
漂洗板 |
V2 |
洗涤液A* |
500 µL |
洗涤板/磁珠板 |
V3 |
磁珠悬浮液 |
20 µL |
洗涤液B* |
500 µL |
||
洗脱板 |
V6 |
洗脱液 |
50-100 µL |
【注】:磁珠悬浮液使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬或充分颠倒混匀,在一次性加样4-5次后,建议再次混匀后再行加样。
5. 按照提取仪的位置,正确安放上述96孔预装板,并放置96深孔磁棒套。
6. 运行如下程序,程序结束后,将洗脱液转移至新的离心管中,溶液可置于-20℃短期保存,-80℃长期保存。
奥盛Auto-Pure32A的提取仪器的提取程序
步骤 |
孔位 |
混合时间(min) |
吸磁时间(sec) |
等待时间(min) |
容积(μL) |
混合速度(1-10) |
温度(℃) |
混合位置(0-100%) |
混合幅度(1-100%) |
吸磁位置(0-100%) |
吸磁速度(1-10) |
移磁珠 |
3 |
0.2 |
60 |
0 |
500 |
5 |
/ |
0 |
80 |
0 |
1 |
结合 |
1 |
15 |
90 |
0 |
600 |
5 |
/ |
0 |
80 |
0 |
1 |
清洗1 |
2 |
1 |
60 |
0 |
500 |
8 |
/ |
0 |
80 |
0 |
1 |
清洗2 |
3 |
1 |
60 |
4 |
500 |
8 |
/ |
0 |
80 |
0 |
1 |
洗脱 |
6 |
8 |
90 |
0 |
100 |
10 |
65 |
0 |
80 |
0 |
1 |
弃磁珠 |
3 |
0.2 |
0 |
0 |
500 |
5 |
/ |
0 |
80 |
0 |
1 |
HB220413
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